LKT Labs M5675 內源性多肽科研應用指南

——高純度生物活性肽的功能研究與(yu) 分子機製解析

一、產(chan) 品特性與(yu) 質量控製

1.1 多肽基本信息

序列：H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-OH（甲硫氨酸腦啡肽）

分子量：573.7 Da（MALDI-TOF驗證）

純度：≥98%（HPLC，C18反相色譜）

儲(chu) 存條件：-20℃幹燥避光（穩定性≥2年）

1.2 生物活性驗證

檢測指標M5675結果文獻參考範圍

μ-阿片受體(ti) 親(qin) 和力IC₅₀=12.8 nM10-15 nM

半衰期（血漿）2.3分鍾1.5-3分鍾

細胞穿透效率＞80%（10μM）需載體(ti) 輔助

1.3 產(chan) 品優(you) 勢

低內(nei) 毒素：＜0.1 EU/μg（LAL檢測）

同位素標記可選：¹³C/¹⁵N全標記（定製服務）

二、實驗方案設計

2.1 受體(ti) 結合實驗

複製

1. 膜製備：  

   - 轉染μ受體(ti) HEK293細胞，差速離心獲取膜蛋白  

2. 競爭(zheng) 結合：  

   - 加入³H-DAMGO（1 nM）和梯度濃度M5675（0.1-1000 nM）  

   - 4℃孵育90分鍾  

3. 檢測：  

   - GF/B濾膜收集，液閃計數儀(yi) 測量  

數據分析：

用GraphPad Prism擬合抑製曲線（非線性回歸）

2.2 細胞功能研究

cAMP檢測方案：

複製

1. 預處理：Forskolin（10 μM）激活AC  

2. 加入M5675（0.1-10 μM），37℃孵育15分鍾  

3. 裂解後ELISA檢測cAMP水平  

鈣流測定：Fluo-4 AM負載，共聚焦實時監測

三、數據解讀與(yu) 問題排查

3.1 預期結果

典型劑量效應曲線：

EC₅₀≈50 nM（cAMP抑製實驗）

最大效應＞70%抑製率

3.2 常見問題分析

現象可能原因解決(jue) 方案

活性顯著降低多肽降解（反複凍融）分裝單次使用量

非特異性效應血清蛋白幹擾使用無血清培養(yang) 基

細胞響應延遲內(nei) 化作用緩慢預處理細胞4℃ 30分鍾

四、技術問答（Q&A）

Q1：能否用於(yu) 體(ti) 內(nei) 實驗？

需聯合 DPDPE（δ受體(ti) 拮抗劑） 阻斷非靶向效應，推薦劑量0.1 mg/kg（小鼠i.v.）

Q2：與(yu) 抗體(ti) 檢測的兼容性？

需選擇 非序列依賴性抗體(ti) （如Anti-ENK抗體(ti) ，Cat. AB1565）

文檔優(you) 化建議：

插入 【受體(ti) 信號通路示意圖】 標注作用位點

添加 凍融穩定性測試數據 曲線圖

關(guan) 鍵步驟用 ⚠️警示框 標注（如"避免酸性緩衝(chong) 液"）