15032352——因美納Illumina NXTR XT 樣本製備試劑盒用戶指南

摘要：本文為(wei) 科研人員提供因美納Illumina NXTR XT 樣本製備試劑盒（貨號15032352）的詳細用戶指南。涵蓋試劑盒基本信息、特性、作用機製、應用場景、操作流程、注意事項、性能參數及常見問題解答，助力科研人員高效開展實驗。
關(guan) 鍵詞：因美納；Illumina NXTR XT；樣本製備試劑盒；用戶指南

一、引言

在基因組學、轉錄組學等科研領域，高通量測序技術已成為(wei) 研究生物分子信息的重要手段。而樣本製備作為(wei) 測序流程的關(guan) 鍵環節，其質量直接影響測序結果的準確性和可靠性。因美納Illumina NXTR XT 樣本製備試劑盒（貨號15032352）是一款專(zhuan) 為(wei) Illumina測序平台設計的高效樣本製備工具，能夠為(wei) 科研人員提供高質量的測序文庫，助力科研工作的順利開展。本文旨在為(wei) 科研人員提供一份詳細、專(zhuan) 業(ye) 的用戶指南，幫助大家更好地了解和使用該試劑盒。

二、產品概述

（一）基本信息

• 品牌：因美納（Illumina）

• 產(chan) 品名稱：Illumina NXTR XT 樣本製備試劑盒

• 貨號：15032352

• 適用平台：Illumina測序平台

• 存儲(chu) 條件：部分組分需冷凍運輸（-25℃到 -15℃），部分組分需冷藏運輸（2℃到 8℃），具體(ti) 見產(chan) 品說明書(shu)

• 有效期：12個(ge) 月（在規定存儲(chu) 條件下）

（二）產品組成

該試劑盒包含多個(ge) 組分，如文庫稀釋緩衝(chong) 液、MiSeqTMDx試劑卡盒、MiSeqTMDx SBS溶液（PR2）、MiSeqTMDx流動槽等。每個(ge) 組分都有其特定的功能和用途，共同協作完成樣本的製備過程。

（三）產品特性

• 高通量：每個(ge) 流動槽可批量處理多達192個(ge) 樣本，大大提高了實驗效率。

• 靈活性：具有更高的樣本通量和批處理選項的靈活性，可滿足不同規模實驗的需求。

• 整合性：將多種生物標誌物檢測整合到一項檢測中，泛癌生物標誌物內(nei) 容與(yu) 關(guan) 鍵指南和臨(lin) 床試驗相匹配。

三、作用機製

Illumina NXTR XT 樣本製備試劑盒基於(yu) 邊合成邊測序（SBS）的原理進行工作。在流動槽中捕獲樣本庫，並使用SBS方法在儀(yi) 器上進行測序。SBS采用可逆終止子方法，在單個(ge) 堿基摻入模板並不斷延伸DNA鏈時進行檢測。具體(ti) 而言，試劑盒中的各種組分協同作用，完成樣本的片段化、末端修複、加A尾、接頭連接、文庫擴增等步驟，最終生成適合測序的文庫。

四、應用場景

（一）基因組學研究

可用於(yu) 全基因組測序、目標區域捕獲測序等，幫助科研人員深入了解生物體(ti) 的基因組結構和變異情況。

（二）轉錄組學研究

適用於(yu) 轉錄組測序（RNA-Seq），能夠準確測定基因的表達水平，為(wei) 研究基因調控機製提供重要信息。

（三）癌症研究

在癌症基因組研究中，該試劑盒可用於(yu) 檢測癌症相關(guan) 的基因突變、融合基因等，為(wei) 癌症的診斷、治療和預後評估提供依據。

（四）單細胞測序

支持單細胞基因組測序和轉錄組測序，為(wei) 研究細胞異質性提供了有力工具。

五、操作流程

（一）樣本準備

1. 提取DNA/RNA：根據樣本類型（如血液、組織、細胞等），選擇合適的方法提取DNA或RNA。

2. 質量檢測：使用Qubit、Picogreen或其他染料法對DNA/RNA濃度進行準確定量，並使用Agilent Bioanalyzer 2100等設備檢測樣本的長度分布和質量。

（二）文庫製備

1. 片段化：將提取的DNA/RNA進行片段化處理，可根據樣本類型和實驗需求選擇合適的片段化方法。

2. 末端修複和加A尾：使用試劑盒中的相應組分對片段化的DNA/RNA進行末端修複和加A尾處理，使其適合後續的接頭連接。

3. 接頭連接：將特定的接頭連接到DNA/RNA片段的兩(liang) 端，接頭中含有測序所需的引物結合位點和索引序列。

4. 文庫擴增：使用高保真DNA聚合酶對連接好接頭的文庫進行擴增，增加文庫的濃度和產(chan) 量。

（三）文庫質檢

1. 濃度檢測：使用qPCR方法進行文庫濃度檢測，排除單端或雙端都不連接Adapter的不可測序文庫的幹擾。

2. 長度分布檢測：通過Agilent Bioanalyzer 2100等設備檢測文庫的長度分布，確保文庫質量符合要求。

（四）上機測序

將質檢合格的文庫按照Illumina測序儀(yi) 的操作要求進行上機測序。

六、注意事項

（一）試劑處理與儲存

1. 部分組分需冷凍運輸和儲(chu) 存，在-25℃到-15℃環境中保持穩定直至有效期末。文庫稀釋緩衝(chong) 液和MiSeqTMDx試劑卡盒為(wei) 一次性使用的試劑，為(wei) 保持穩定，在有效日期前隻允許解凍到室溫1次。一旦解凍，必須裝載樣本庫並立即在MiSeqTMDx儀(yi) 器上運行。或者，解凍的試劑盒可在2℃到8℃的環境下最多保存6小時，然後裝載樣本庫並立即在MiSeqTMDx儀(yi) 器上運行。

2. 部分組分需冷藏運輸和儲(chu) 存，在2℃到8℃環境中保持穩定直至有效期末。MiSeqTMDx SBS溶液（PR2）和MiSeqTMDx流動槽為(wei) 一次性使用產(chan) 品。

3. 試劑外觀的變化可能表明材料的變質，應不使用試劑。

（二）操作環境

1. 提前開好空調，控製房間溫度和濕度。溫度和濕度極大地影響試劑效果和光路，溫度高測序速度下降且質量不好，濕度大不僅(jin) 會(hui) 影響光路，還會(hui) 使得flowcell上麵凝結水滴，導致測序直接失敗。

2. 搬運儀(yi) 器的時候需要鎖住零部件，要讓工程師來做，否則機器可能出問題，影響光路。

（三）實驗操作

1. 在操作過程中，應嚴(yan) 格遵循試劑盒說明書(shu) 的要求，避免交叉汙染。

2. 使用無RNase和DNase的槍頭、EP管進行試驗，確保實驗環境的潔淨度。

3. 進行文庫擴增前，應確保PCR儀(yi) 已經調試好並處於(yu) 穩定的狀態。

七、性能參數

八、常見問題解答

（一）文庫產量低

可能原因：樣本質量差、擴增循環數不足、試劑質量問題等。解決(jue) 方法：優(you) 化樣本提取方法，增加擴增循環數，更換高質量的試劑。

（二）測序質量差

可能原因：文庫質量不佳、測序儀(yi) 狀態不良、環境因素等。解決(jue) 方法：重新製備文庫，檢查測序儀(yi) 的狀態並進行維護，控製實驗環境的溫度和濕度。

（三）交叉汙染

可能原因：操作不規範、實驗器材未清潔幹淨等。解決(jue) 方法：嚴(yan) 格遵循操作規程，使用無汙染的實驗器材，對實驗區域進行定期清理。

九、結論

因美納Illumina NXTR XT 樣本製備試劑盒（貨號15032352）是一款功能強大、性能穩定的樣本製備工具，為(wei) 科研人員提供了高效、準確的樣本製備解決(jue) 方案。通過遵循本用戶指南中的操作流程和注意事項，科研人員可以充分發揮該試劑盒的優(you) 勢，提高實驗效率和準確性。希望本指南能夠幫助用戶更好地了解和使用該試劑盒，為(wei) 科研工作提供有力支持。