MCA6099GA AbD Serotec MOUSE ANTI PIG B CELL SUBSET 用戶指南

MCA6099GA AbD Serotec MOUSE ANTI PIG B CELL SUBSET 用戶指南

——精準識別豬B細胞亞(ya) 群，助力免疫學與(yu) 動物疾病模型研究

一、產品概述

MCA6099GA AbD Serotec MOUSE ANTI PIG B CELL SUBSET 是AbD Serotec公司（現隸屬於(yu) MorphoSys集團）研發的單克隆抗體(ti) ，專(zhuan) 為(wei) 識別豬B細胞亞(ya) 群設計。該抗體(ti) 通過小鼠雜交瘤技術製備，具備高特異性、高親(qin) 和力及低背景信號的特點，適用於(yu) 流式細胞術（FCM）、免疫組織化學（IHC）、免疫熒光（IF）及Western Blot（WB）等實驗。

核心參數：

• 貨號：MCA6099GA

• 規格：0.1 mg/支（可滿足100次流式實驗或20次WB實驗）

• 保存條件：-20℃避光保存，避免反複凍融

• 有效期：24個(ge) 月（未開封）

• 應用領域：豬免疫學、異種移植研究、豬病模型開發等

二、技術優勢

1. 高特異性

• 免疫原：重組豬B細胞表麵抗原，確保抗體(ti) 對目標B細胞亞(ya) 群的精準識別。

• 交叉反應性：經ELISA與(yu) WB驗證，與(yu) 豬B細胞特異性結合，不與(yu) T細胞、NK細胞等其他免疫細胞交叉反應。

2. 多應用兼容性

• 流式細胞術：推薦稀釋比例1:50-1:200，可檢測外周血單個(ge) 核細胞（PBMC）中B細胞比例。

• 免疫組織化學：適用於(yu) 石蠟切片與(yu) 冷凍切片，推薦稀釋比例1:100-1:500。

• 免疫熒光：可與(yu) Alexa Fluor® 488、FITC等熒光標記物偶聯，實現多色熒光標記。

• Western Blot：檢測靈敏度達1 ng，適用於(yu) 豬組織裂解液或細胞裂解液中的B細胞相關(guan) 蛋白檢測。

3. 質量驗證

• 純度：通過SDS-PAGE驗證，純度≥95%。

• 內(nei) 毒素含量：<0.1 EU/μg，符合無菌實驗要求。

三、操作指南

（一）實驗前準備

1. 試劑與(yu) 耗材

• MCA6099GA抗體(ti) （貨號MCA6099GA）

• 熒光標記二抗（如Goat Anti-Mouse IgG Alexa Fluor® 488）

• 封閉液（5% BSA或10%山羊血清）

• 洗滌液（PBS + 0.1% Tween-20）

2. 儀(yi) 器設置

• 流式細胞儀(yi) ：設置FL1通道（激發波長488 nm，發射波長525 nm）。

• 共聚焦顯微鏡：選擇488 nm激光器，配備530/30 nm濾光片。

（二）實驗操作

1. 流式細胞術

• 樣本處理：收集豬PBMC，用PBS洗滌後重懸於(yu) 100 μL FACS緩衝(chong) 液中。

• 抗體(ti) 孵育：加入1 μL MCA6099GA抗體(ti) （1:100稀釋），4℃避光孵育30分鍾。

• 洗滌：加入2 mL FACS緩衝(chong) 液，300 × g離心5分鍾，重複2次。

• 二抗孵育：加入1 μL Alexa Fluor® 488標記二抗（1:500稀釋），4℃避光孵育30分鍾。

• 檢測：重懸於(yu) 500 μL FACS緩衝(chong) 液中，上機檢測。

2. 免疫組織化學

• 切片製備：取豬脾髒組織，經4%多聚甲醛固定後，石蠟包埋切片（厚度5 μm）。

• 抗原修複：將切片置於(yu) 檸檬酸緩衝(chong) 液（pH 6.0）中，微波加熱10分鍾。

• 封閉：滴加5% BSA，37℃孵育30分鍾。

• 一抗孵育：滴加MCA6099GA抗體(ti) （1:200稀釋），4℃過夜。

• 顯色：加入HRP標記二抗，DAB顯色後蘇木素複染。

3. Western Blot

• 電泳：取豬脾髒組織裂解液（20 μg總蛋白），經10% SDS-PAGE分離。

• 轉膜：將蛋白轉移至PVDF膜，300 mA恒流轉印90分鍾。

• 封閉：5%脫脂奶粉封閉1小時。

• 一抗孵育：MCA6099GA抗體(ti) （1:1000稀釋），4℃孵育過夜。

• 顯色：加入HRP標記二抗，ECL化學發光顯影。

（三）數據分析

1. 流式細胞術

• 使用FlowJo軟件分析B細胞比例，設置CD3⁻門控後統計B細胞陽性細胞。

2. 免疫組織化學

• 使用Image J軟件定量分析B細胞密度，計算每平方毫米內(nei) 的陽性細胞數。

3. Western Blot

• 使用Bio-Rad Image Lab軟件分析條帶灰度值，與(yu) 內(nei) 參（如β-actin）比值確定蛋白表達量。

四、使用技巧與高效操作

1. 樣本保存

• 豬組織樣本建議液氮速凍後保存於(yu) -80℃，避免反複凍融。

• PBMC樣本需在采集後4小時內(nei) 處理，或保存於(yu) 液氮中。

2. 抗體(ti) 稀釋

• 使用抗體(ti) 稀釋液（含1% BSA的PBS）進行稀釋，避免使用含NaN₃的緩衝(chong) 液。

• 未用完的稀釋抗體(ti) 可分裝後保存於(yu) -20℃，避免反複凍融。

3. 實驗優(you) 化

• 流式細胞術：若背景信號高，可增加FACS緩衝(chong) 液中BSA濃度至5%。

• 免疫組織化學：若顯色不均，可延長抗原修複時間至15分鍾。

五、注意事項

1. 安全規範

• 操作時佩戴手套與(yu) 口罩，避免抗體(ti) 汙染。

• 廢棄物需按生物安全等級處理。

2. 操作細節

• 移液精度：使用校準後的移液器，誤差<±1%。

• 孵育溫度：一抗與(yu) 二抗孵育需在4℃或室溫下進行，避免37℃高溫導致非特異性結合。

3. 故障排除

• 無信號：檢查抗體(ti) 是否失效（可通過WB檢測抗體(ti) 質量），或樣本是否正確處理。

• 高背景：增加封閉時間或降低抗體(ti) 濃度。

六、用戶評價與支持

• 用戶反饋：

• “MCA6099GA抗體(ti) 在豬B細胞檢測中表現出的特異性，背景信號極低。"

• “適用於(yu) 多種實驗平台，顯著提高了實驗效率。"