Chromotek實驗免疫試劑盒用戶指南

Chromotek實驗免疫試劑盒用戶指南

——精準捕獲，賦能蛋白研究

一、產品概述

Chromotek公司成立於(yu) 2008年，是納米抗體(ti) （Nanobody®）技術的全球，其開發的GFP-Trap®、RFP-Trap®等試劑盒已成為(wei) 熒光蛋白標記蛋白研究的金標準。通過將納米抗體(ti) 與(yu) 瓊脂糖珠、磁珠等基質偶聯，Chromotek試劑盒可高效、特異性地富集目標蛋白，廣泛應用於(yu) 免疫沉澱（IP）、染色質免疫沉澱（ChIP）、免疫熒光（IF）等實驗。

二、核心優勢

1. 高親(qin) 和力與(yu) 特異性

• 解離常數（KD）：GFP-Trap®與(yu) GFP的KD值低至1 pM，遠低於(yu) 傳(chuan) 統抗體(ti) （nM級）。

• 交叉反應：與(yu) 山羊、小鼠、大鼠或人抗體(ti) 無顯著同源性，避免非特異性結合。

2. 操作便捷性

• 磁珠/瓊脂糖珠雙選擇：磁珠（如GFP-Trap®_M）支持磁力分離，瓊脂糖珠（如GFP-Trap®_A）適用於(yu) 離心操作。

• 一步法洗脫：通過95°C SDS-PAGE緩衝(chong) 液或甘氨酸-HCl（pH 2.5）快速洗脫，無需複雜步驟。

3. 應用場景多樣性

• IP/Co-IP：驗證蛋白-蛋白相互作用。

• ChIP：研究DNA-蛋白結合。

• IF/IHC：細胞/組織定位分析。

• Pull-down：體(ti) 外蛋白相互作用篩選。

三、熱門產品及應用領域

應用示例：

• 蛋白相互作用研究：使用GFP-Trap®_A從(cong) HEK293細胞中富集GFP-Bub1融合蛋白，通過質譜分析鑒定紡錘體(ti) 組裝檢查點相關(guan) 蛋白。

• 表觀遺傳(chuan) 學：利用Dnmt1-Trap®研究DNA甲基化在DNA修複中的作用。

• 超分辨率成像：結合GFP-Booster，在STORM顯微鏡下實現GFP標簽蛋白的納米級定位。

四、技術參數與操作指南

（一）產品規格

• 形式：預偶聯瓊脂糖珠/磁珠

• 規格：250 μg抗體(ti) （如GFP-Trap® gt-250）、20次反應（如GFP-Trap®_A gta-20）

• 儲(chu) 存條件：4°C（短期）、-20°C（長期），避免反複凍融

（二）操作步驟（以GFP-Trap®_A為例）

1. 細胞裂解

• 收獲細胞，加入預冷裂解緩衝(chong) 液（含蛋白酶抑製劑），冰上孵育30分鍾。

• 14,000 × g離心10分鍾，取上清。

2. 免疫沉澱

• 平衡GFP-Trap®_A：用稀釋緩衝(chong) 液洗滌2次。

• 加入細胞裂解液，4°C旋轉孵育1小時。

• 磁力分離或離心，棄上清。

3. 洗滌

• 用洗滌緩衝(chong) 液洗滌3次，可選增加鹽濃度（150-500 mM NaCl）以提高特異性。

4. 洗脫

• 方案一：95°C SDS-PAGE緩衝(chong) 液煮沸10分鍾。

• 方案二：0.2 M甘氨酸-HCl（pH 2.5）孵育30秒，立即中和。

5. 分析

• SDS-PAGE、Western Blot或質譜分析。

（三）注意事項

• 避免非特異性結合：洗滌時確保洗滌緩衝(chong) 液充分覆蓋珠子。

• 洗脫條件優(you) 化：對於(yu) 敏感蛋白，可降低甘氨酸-HCl濃度或縮短孵育時間。

• 磁珠使用：磁力分離後，用移液器小心去除殘留液體(ti) ，避免珠子損失。

五、常見問題與解決方案

六、質量保證與認證

• 嚴(yan) 格質檢：每批次試劑盒需通過ELISA、SPR、SDS-PAGE等多項檢測。

• ISO 9001認證：生產(chan) 流程符合國際質量管理標準。

• 數據支持：提供完整的產(chan) 品說明書(shu) 、CoA（質檢報告）及文獻引用。