UFC5010BK Merck Millipore 超濾管 0.5ml 10KD 用戶指南

UFC5010BK Merck Millipore 超濾管 0.5ml 10KD 用戶指南

——高效生物分子濃縮與(yu) 純化的實驗室利器

一、產品概述

UFC5010BK 是默克密理博（Merck Millipore）旗下 Amicon® Ultra 係列超濾離心管，專(zhuan) 為(wei) 生物分子（如蛋白質、核酸、抗體(ti) 等）的濃縮、脫鹽及緩衝(chong) 液置換設計。該產(chan) 品采用 10,000 Dalton 分子量截留（MWCO） 的再生纖維素膜（Ultracel®-10），結合垂直濾膜與(yu) 反向旋轉回收技術，可實現 90%以上樣品回收率 和 25–30倍濃縮係數，適用於(yu) HPLC 前處理、蛋白純化及臨(lin) 床樣本分析等場景。

二、技術規格

• 膜材質：Ultracel®再生纖維素

• 截留分子量（MWCO）：10,000 Dalton

• 樣品容量：0.5 mL（最大起始體(ti) 積）

• 濃縮後體(ti) 積：15–20 μL（典型值）

• 離心條件：

• 濃縮：14,000 × g（最大），推薦 7,500–10,000 × g

• 回收：1,000 × g（反向旋轉）

• 化學兼容性：pH 1–9，兼容 SDS、Tris-HCl、尿素等緩衝(chong) 體(ti) 係

• 無菌性：非無菌，一次性使用

• 存儲(chu) 條件：15–30°C，保質期 3 年

三、核心優勢

1. 高效濃縮

• 垂直濾膜設計減少濃差極化，避免濾膜堵塞，處理時間僅(jin) 需 10–30分鍾。

• 示例：0.25 mg/mL 細胞色素 c（12.4 kDa）濃縮後回收率 >95%。

2. 高回收率

• 低吸附濾膜與(yu) 聚丙烯外殼結合，實現 >90% 樣品回收率（稀釋起始溶液）。

• 反向旋轉功能確保濃縮物回收，避免吸量誤差。

3. 靈活應用

• 支持蛋白、核酸、抗體(ti) 等生物分子的濃縮與(yu) 純化。

• 可用於(yu) 去除引物、連接子或標記反應中的高分子雜質。

四、操作流程

（一）預處理

1. 潤洗：

• 新管使用前，加入超純水至膜上方，冰浴或 4°C 預冷 5 分鍾，倒出液體(ti) 。

• 重複 1 次，確保膜潤濕。

2. 平衡：

• 將超濾管插入 1.5 mL 離心管中，使用相同型號空管進行離心平衡。

（二）加樣

1. 樣品量：

• 加入體(ti) 積不超過管頂白線（通常 ≤500 μL）。

• 示例：0.5 mL 1 mg/mL BSA 溶液。

2. 離心：

• 4°C 預冷離心機，設置轉速 ≤10,000 × g，離心 15–30 分鍾。

• 示例參數：7,500 × g、25 分鍾（10,000 MWCO 膜濃縮 0.25 mg/mL 細胞色素 c）。

（三）濃縮與回收

1. 濃縮判斷：

• 當濾液體(ti) 積接近 1 mL 時，取 50 μL 緩衝(chong) 液 +10 μL 濾液，通過 Bradford 法或電泳檢測蛋白泄漏。

2. 緩衝(chong) 液置換：

• 濃縮至 1 mL 後，加入等體(ti) 積新緩衝(chong) 液（經 0.22 μm 過濾），重複離心 3 次。

3. 終體(ti) 積調整：

• 根據需求，將樣品濃縮至 ≤50 μL（如需更高濃度，可降低轉速至說明書(shu) 推薦值以下）。

4. 反向旋轉回收：

• 離心結束後，將超濾管倒置，1,000 × g 離心 1–2 分鍾，回收濃縮液。

（四）清洗與保存

1. 清洗：

• 使用後，用超純水衝(chong) 洗 3 次，再用 75% 乙醇衝(chong) 洗 1 次。

• 殘留水可通過 1,000 × g 離心 1 分鍾去除。

2. 保存：

• 幹燥後置於(yu) 4°C 或 -20°C 保存，避免膜幹燥開裂。

五、應用案例

1. 蛋白質濃縮

• 使用 UFC5010BK 將 1 mL 0.5 mg/mL BSA 濃縮至 100 μL，回收率 92%（7,500 × g、10 分鍾）。

2. 核酸脫鹽

• 0.5 mL 50 ng/μL DNA 溶液經 3 次緩衝(chong) 液置換，鹽濃度從(cong) 150 mM 降至 10 mM 以下。

3. 抗體(ti) 純化

• 從(cong) 組織培養(yang) 基中濃縮抗體(ti) ，結合 UFC5010BK 與(yu) 蛋白 A 親(qin) 和柱，實現抗體(ti) 純化與(yu) 脫鹽同步進行。

六、質量控製與驗證

1. 批次一致性：

• MWCO 驗證（電泳法）

• 回收率測試（BSA/DNA 標準品）

• 膜完整性檢測（氣泡壓力法）

• 每批次提供 CoA（Certificate of Analysis），包含：

2. 性能驗證：

• 重複性測試（n=10）：BSA 回收率 CV ≤3%，DNA 濃縮時間 CV ≤5%。

七、注意事項

1. 操作安全：

• 避免膜幹燥，潤濕後保持濕潤狀態直至使用結束。

• 離心時確保轉子平衡，防止離心機損壞。

2. 樣品兼容性：

• 高粘度樣品（如甘油）需稀釋後使用。

• 強酸/強堿溶液可能腐蝕再生纖維素膜，需預實驗驗證。

3. 離心條件：

• 離心時間過長可能導致蛋白沉澱，建議分步離心並監測濾液狀態。