556547 FITC偶聯Annexin-V凋亡檢測試劑盒用戶指南

556547 FITC偶聯Annexin-V凋亡檢測試劑盒用戶指南

——精準檢測細胞凋亡的科研利器

一、產品概述

556547 FITC偶聯Annexin-V凋亡檢測試劑盒（貨號：556547）由美國BD公司（BD Biosesciences）研發，基於(yu) Annexin V與(yu) 磷脂酰絲(si) 氨酸（PS）的高親(qin) 和力特性，通過FITC熒光標記實現凋亡細胞的早期識別。該試劑盒適用於(yu) 流式細胞術（FCM），可區分活細胞、早期凋亡細胞、晚期凋亡/壞死細胞，是細胞凋亡研究的經典工具。

二、技術規格

• 包裝規格：100測試/盒

• 儲(chu) 存條件：2–8℃（短期）、-20℃（長期，避免反複凍融）

• 有效期：12個(ge) 月（自生產(chan) 日期起）

• 核心組分：

• Annexin V Binding Buffer（10×）：含HEPES、NaCl、CaCl₂，用於(yu) 維持PS外翻的離子環境。

• FITC Annexin V：分子量35–36 kDa，Ca²⁺依賴性磷脂結合蛋白，與(yu) 暴露的PS結合。

• Propidium Iodide（PI）：核酸染料，僅(jin) 能透過晚期凋亡/壞死細胞的細胞膜。

三、核心優勢

1. 高靈敏度

• FITC Annexin V可檢測PS外翻這一凋亡早期事件，早於(yu) DNA斷裂等核變化。

• 在Jurkat細胞凋亡模型中，可檢測到0.5%的早期凋亡細胞。

2. 多階段區分

• 活細胞：Annexin V⁻/PI⁻

• 早期凋亡：Annexin V⁺/PI⁻

• 晚期凋亡/壞死：Annexin V⁺/PI⁺

• 通過Annexin V與(yu) PI的聯合染色，可區分：

3. 操作簡便

• 無需固定細胞，15分鍾孵育即可完成染色，適配高通量篩選。

四、操作流程

（一）樣本準備

1. 細胞收集：

• 懸浮細胞：1000 rpm離心5分鍾，棄上清。

• 貼壁細胞：用不含EDTA的胰酶消化，2000 rpm離心5–10分鍾，棄上清。

2. 洗滌：

• 用預冷的1×PBS（pH 7.4）重懸細胞，2000 rpm離心5分鍾，重複1次。

3. 濃度調整：

• 用1×Annexin V Binding Buffer調整細胞濃度至1×10⁶細胞/mL。

（二）染色

1. 試劑添加：

• 5 μL FITC Annexin V

• 5 μL PI（20 μg/mL）

• 取100 μL細胞懸液至流式管中，加入：

2. 孵育：

• 室溫避光孵育15分鍾。

3. 稀釋：

• 加入400 μL 1×Annexin V Binding Buffer，輕柔混勻。

（三）流式檢測

• 參數設置：

• FITC通道（Ex/Em：494/518 nm）檢測Annexin V

• PerCP/Cy5.5或ECD通道檢測PI

• 結果分析：

• Annexin V⁻/PI⁻：活細胞

• Annexin V⁺/PI⁻：早期凋亡細胞

• Annexin V⁺/PI⁺：晚期凋亡/壞死細胞

五、應用案例

1. 腫瘤研究

• 在乳腺癌細胞係（MCF-7）中，通過該試劑盒檢測到紫杉醇處理後早期凋亡細胞比例從(cong) 5%升至35%。

2. 免疫學研究

• 發現T細胞活化後48小時，Annexin V⁺/PI⁻細胞比例顯著增加，提示凋亡早期事件。

3. 藥物毒性評估

• 在肝細胞（HepG2）中，檢測到順鉑處理後晚期凋亡/壞死細胞比例從(cong) 2%升至28%。

六、質量控製與驗證

1. 批次一致性：

• Annexin V活性（≥95%）

• FITC熒光強度（CV≤5%）

• PI純度（HPLC驗證≥99%）

• 每批次試劑盒附帶CoA（Certificate of Analysis），包含：

2. 性能驗證：

• 使用Jurkat細胞係進行重複性測試（n=10），早期凋亡細胞檢測CV≤3%。

七、注意事項

1. 操作安全：

• FITC和PI為(wei) 光敏物質，需避光操作。

• PI有毒性，操作時需佩戴手套，避免接觸皮膚和黏膜。

2. 樣本處理：

• 避免過度消化貼壁細胞，推薦用不含EDTA的胰酶處理。

• 血液樣本需去除血小板，因其含PS可幹擾結果。

3. 檢測時效：

• 染色後宜在1小時內(nei) 完成流式檢測，時間過長可能導致凋亡率偏高。