Qubit RNA IQ Assay Kit 通常使用的是 Invitrogen 公司專(zhuan) 有的熒光染料,不同品牌的熒光染料可能在多個(ge) 方麵影響該試劑盒的檢測原理及結果:
結合特性不同
特異性:Qubit RNA IQ Assay Kit 的原配熒光染料對 RNA 具有高度特異性,能準確結合 RNA,排除其他生物分子如 DNA、蛋白質等的幹擾。若使用其他品牌熒光染料,可能無法如此精準地特異性結合 RNA,比如一些染料可能也會(hui) 與(yu) DNA 有一定程度的結合,從(cong) 而導致檢測結果中 RNA 濃度出現偏差,因為(wei) 檢測到的熒光信號可能包含了 DNA 與(yu) 染料結合產(chan) 生的部分。
結合位點與(yu) 親(qin) 和力:原配熒光染料與(yu) RNA 的結合位點和親(qin) 和力經過精心設計,可保證在一定條件下與(yu) RNA 充分且穩定結合,準確反映 RNA 的量。不同品牌染料的結合位點和親(qin) 和力可能不同,可能無法在相同條件下與(yu) RNA 達到最佳結合狀態,例如結合過強可能導致染料難以從(cong) RNA 上解離,影響檢測的動態範圍;結合過弱則可能在檢測過程中染料脫落,使熒光信號不穩定,最終影響濃度測定的準確性。
熒光特性差異
激發與(yu) 發射波長:Qubit 儀(yi) 器是根據原配熒光染料的激發和發射波長特性進行優(you) 化設計的。其他品牌熒光染料的激發和發射波長可能與(yu) 原配染料不同,若使用這些染料,Qubit 儀(yi) 器可能無法提供合適的激發光,或者不能有效檢測到發射光,導致無法準確測量熒光信號強度,進而無法準確得出 RNA 濃度。
熒光量子產(chan) 率:熒光量子產(chan) 率決(jue) 定了熒光染料在吸收光能後發射熒光的效率。原配熒光染料具有較高且穩定的量子產(chan) 率,能保證在與(yu) RNA 結合後產(chan) 生較強且穩定的熒光信號,以實現準確檢測。不同品牌的染料量子產(chan) 率可能較低,產(chan) 生的熒光信號較弱,增加了檢測的背景噪音,降低了檢測的靈敏度和準確性;或者量子產(chan) 率不穩定,會(hui) 使熒光信號隨時間或環境條件變化而波動,影響結果的重複性。
對 RNA 質量評估的影響
片段大小區分能力:Qubit RNA IQ Assay Kit 的原配染料通過對不同大小 RNA 片段的熒光信號分布分析,來評估 RNA 的完整性,如計算 RIN 值和 28S/18S 比值等。不同品牌的熒光染料可能對不同大小 RNA 片段的結合特性不同,無法準確反映不同片段的真實分布情況,導致計算出的 RIN 值和 28S/18S 比值不準確,不能真實反映 RNA 的質量。
構象敏感性:原配熒光染料對 RNA 的二級結構等構象有一定的敏感性,能更全麵地評估 RNA 的質量。而其他品牌染料可能對 RNA 構象不敏感,無法檢測到 RNA 結構變化對其質量的影響,從(cong) 而使檢測結果不能準確反映 RNA 的實際質量狀況。
由於不同品牌的熒光染料在結合特性、熒光特性以及對 RNA 質量評估方麵與 Qubit RNA IQ Assay Kit 原配熒光染料存在差異,會影響試劑盒檢測原理的實現,導致檢測結果不準確、不可靠,因此不建議在該試劑盒中隨意使用其他品牌的熒光染料。