分享一些成功運用NEB R3142S--NEB/KpnI-HF試劑盒進行科研項目的案例

構建植物表達載體(ti) 1：在 “一種植物葉片高表達雙向啟動子及其應用" 的研究中，科研人員取 10μg 人工直接合成的 promoter at1g52220/30 片段與(yu) 1μg 的 pcambia1300 - egfp - mcherry 空載體(ti) 質粒，分別用 BamHI（NEB，#R3136S）及 KpnI（NEB，#R3142S）雙酶切，37℃酶切 3 小時。割膠回收酶切反應產(chan) 物，用 T4 DNA 連接酶連接，連接產(chan) 物轉化大腸杆菌 DH5α 感受態細胞，最終獲得了 pcambia1300 - egfp - mcherry - promoter at1g52220/30 載體(ti) ，用於(yu) 後續在煙草葉片中的瞬時表達實驗，驗證了雙向啟動子的有效性。

構建融合蛋白表達載體(ti) 3：在 “一種 DNA 環化分子及其用途的製作方法" 的研究中，以 LDB1 的 cDNA 作為(wei) PCR 模板，設計帶有 KpnI - HF 酶切位點的引物，擴增 LDB1 的 dimmer domain（DD）片段。擴增產(chan) 物經純化後，與(yu) pST1374 - N - NLS - Flag - Linker - dCas9 載體(ti) 用 NotI - HF（NEB，R3189S）和 KpnI - HF（NEB，R3142S）做酶切，37℃孵育 2h。酶切產(chan) 物經割膠回收後，通過 T4 連接酶連接，轉化塗板，經 Sanger 測序得到正確的 DD - dCas9 質粒，用於(yu) 後續研究融合蛋白 LDB1 - dCas9 對基因表達的調控作用。