Invitrogen Qubit RNA IQ Assay Kit 實驗操作是否符合規範

操作前準備

• 耗材與(yu) 試劑檢查：確認使用的槍頭、離心管等耗材無 RNA 酶，若有疑慮，可通過查看產(chan) 品說明或進行 RNA 酶檢測試驗來驗證。同時，檢查試劑盒內(nei) 試劑是否齊全，有無過期、變色、沉澱等異常情況，確保試劑在有效期內(nei) 且保存條件符合要求。

• 儀(yi) 器設備檢查：檢查 Qubit 熒光計等儀(yi) 器設備是否正常運行，可查看儀(yi) 器的開機自檢報告，確認光路係統、檢測模塊等提示。並且要確認儀(yi) 器已按照規定的周期進行校準，校準記錄完整，以保證儀(yi) 器檢測的準確性。

操作過程執行

• 樣本處理環節

• 樣本量準確性：查看吸取樣本的體(ti) 積是否準確，可通過檢查移液器的設定值與(yu) 實際吸取量是否一致來驗證，如使用移液器校準器進行校準驗證。對於(yu) RNA 樣本的稀釋，要檢查稀釋倍數是否準確，計算過程是否正確。

• 操作手法規範性：觀察在樣本轉移、混合等操作過程中，是否避免了劇烈振蕩和過度吹打，以防 RNA 斷裂。同時，要確認在加入試劑和樣本時，是否按照說明書(shu) 的要求緩慢加入，避免產(chan) 生氣泡。

• 避免汙染措施：檢查實驗人員是否佩戴了幹淨的手套、口罩，實驗台麵和儀(yi) 器是否經過 RNA 酶去除處理，操作過程中是否使用了無 RNA 酶的耗材，以防止外源 RNA 酶和雜質的汙染。

• 試劑使用環節

• 試劑平衡與(yu) 混勻：確認試劑從(cong) 冰箱取出後是否平衡至室溫，且在使用前是否輕輕混勻。可通過觀察試劑瓶上的標簽是否有未混勻的痕跡，或輕輕搖晃試劑瓶感受試劑的均勻程度來判斷。

• 試劑添加準確性：檢查試劑的添加量是否準確，移液器的使用是否正確，有無漏液、吸液不準確等情況。可以通過檢查移液器的吸頭是否安裝緊密，以及在添加試劑後觀察試劑液麵的高度是否與(yu) 設定值相符來判斷。

操作後結果分析

• 結果重複性：對同一樣本進行多次測量，查看結果是否具有良好的重複性。一般來說，多次測量的 RNA IQ 值和濃度的變異係數（CV）應在合理範圍內(nei) ，如 CV 值小於(yu) 10% 通常表示結果重複性較好。

• 對照結果：檢查陽性對照和陰性對照的結果是否符合預期。陽性對照的 RNA IQ 值和濃度應與(yu) 已知標準品的數值相近，陰性對照的檢測結果應接近於(yu) 零，否則說明實驗存在問題，如試劑汙染或操作失誤。

• 與(yu) 其他方法的一致性：將 Qubit RNA IQ Assay Kit 的檢測結果與(yu) 其他可靠的 RNA 定量或質量評估方法（如紫外分光光度法、瓊脂糖凝膠電泳等）的結果進行比較，若結果一致或相近，則說明實驗操作可能是規範的；若結果差異較大，需仔細分析原因，可能是實驗操作不規範，也可能是樣本本身的問題或儀(yi) 器故障。