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MTT 比色法
原理:活細胞中的線粒體(ti) 脫氫酶能將 MTT(四唑鹽)還原成不溶性的藍紫色結晶甲臢,並沉積在細胞中,而死細胞無此功能。通過測定甲臢在特定波長下的吸光度,可反映細胞的活性和數量。
操作:將細胞接種到 96 孔板中,培養(yang) 一段時間後加入 MTT 溶液,繼續孵育。然後去除上清液,加入二甲基亞(ya) 碸(DMSO)溶解甲臢,用酶標儀(yi) 測定吸光度。
應用:常用於(yu) 細胞增殖、細胞毒性和藥物篩選等實驗。
CCK - 8 法
原理:與(yu) MTT 法類似,細胞內(nei) 的脫氫酶可以將 CCK - 8 試劑中的 WST - 8 還原成水溶性的橙黃色甲臢。活細胞數量與(yu) 甲臢生成量成正比,通過檢測吸光度來衡量細胞活性。
操作:將細胞接種於(yu) 培養(yang) 板,加入 CCK - 8 溶液,孵育後直接用酶標儀(yi) 測定吸光度。
應用:廣泛應用於(yu) 細胞活性檢測、細胞增殖分析、藥物篩選等領域。該方法操作簡便,靈敏度高,且無需裂解細胞。
熒光染色法
原理:利用一些熒光染料對活細胞和死細胞進行特異性染色。例如,Calcein - AM 可被活細胞內(nei) 的酯酶水解,產(chan) 生綠色熒光,而死細胞由於(yu) 酯酶活性喪(sang) 失,不能產(chan) 生熒光;碘化丙啶(PI)隻能進入死細胞,與(yu) DNA 結合後發出紅色熒光。通過熒光顯微鏡或流式細胞儀(yi) 可對細胞進行觀察和分析。
操作:將細胞與(yu) 熒光染料孵育,然後用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀(yi) 檢測。
應用:可用於(yu) 區分活細胞和死細胞,以及對細胞進行定量分析,常用於(yu) 細胞凋亡、細胞周期等研究。
ATP 檢測法
原理:ATP 是細胞內(nei) 的能量貨幣,活細胞中含有大量 ATP,而死細胞中的 ATP 會(hui) 迅速降解。通過檢測細胞內(nei) ATP 的含量,可反映細胞的活性。
操作:使用熒光素 - 熒光素酶試劑盒,該試劑盒中的熒光素在熒光素酶和 ATP 的作用下會(hui) 發出熒光,熒光強度與(yu) ATP 含量成正比。將細胞裂解後加入試劑盒試劑,用熒光檢測儀(yi) 測定熒光強度。
應用:常用於(yu) 細胞活性檢測、細胞增殖分析以及藥物對細胞代謝的影響等研究。
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