
光學性能:聚合物蓋玻片底部或玻璃底部,均具有高光學質量。聚合物蓋玻片底部的折射率(nd 589nm)為(wei) 1.52,阿貝數 56,厚度 180μm(#1.5),在高分辨率顯微鏡下能提供清晰圖像,且自發熒光低,對細胞成像幹擾極小 。玻璃底部(如用於(yu) 特定應用的 1.5h 玻璃蓋玻片,厚度 170μm±5μm)同樣具備出色光學性能,適用於(yu) 全內(nei) 反射熒光(TIRF)、單分子及超分辨率顯微鏡等成像技術 。
理想細胞生長環境:經 ibiTreat 處理的表麵為(wei) 細胞提供了良好的粘附與(yu) 生長條件,多數貼壁細胞無需額外包被即可在此表麵良好生長 。對於(yu) 有特殊需求的細胞培養(yang) ,還可進行細胞外基質(ECM)蛋白包被。而未處理的疏水表麵,可用於(yu) 需特定包被的貼壁細胞培養(yang) ;bioinert 表麵則阻止細胞粘附,適合懸浮細胞、細胞聚集體(ti) 、球體(ti) 及類器官培養(yang) 。
減少蒸發設計:培養(yang) 皿蓋子設有鎖扣位置,能有效減少液體(ti) 蒸發,為(wei) 在非加濕環境下的長期細胞培養(yang) 與(yu) 研究提供穩定條件。同時,培養(yang) 皿采用透氣塑料材質,確保細胞培養(yang) 過程中二氧化碳和氧氣等氣體(ti) 的正常交換 。
操作便捷與(yu) 通用性:標準 35mm 直徑規格,方便操作與(yu) 適配各類實驗室設備 。高壁設計不僅(jin) 增加了培養(yang) 容積(2ml),還便於(yu) 日常使用時的拿取與(yu) 操作 。此外,該培養(yang) 皿與(yu) 所有染色和固定溶劑兼容,可滿足多種細胞實驗需求。
細胞培養(yang) 與(yu) 成像:適用於(yu) 各類細胞係的培養(yang) ,以及原代細胞培養(yang) 。結合其高分辨率成像能力,可用於(yu) 免疫熒光染色後細胞的寬場和共聚焦熒光顯微鏡觀察,也適合活細胞的長時間成像研究,實時監測細胞生長、增殖、分化等動態過程 。
轉染實驗:為(wei) 細胞轉染提供穩定的培養(yang) 環境,可通過後續成像或分析技術,評估轉染效率與(yu) 轉染後細胞的功能變化 。
細胞定位與(yu) 計數:帶有 500µm 網格(如 µ-Dish 35 mm, high grid - 500)的版本,便於(yu) 對細胞或細胞簇進行定位,在計算轉染效率、統計特定區域內(nei) 細胞事件數量等實驗中發揮重要作用 。
特殊顯微鏡應用:使用特殊 DIC 蓋子,可用於(yu) 微分幹涉相差(DIC)顯微鏡觀察 。玻璃底部的培養(yang) 皿版本,特別適用於(yu) TIRF、單分子應用以及超分辨率顯微鏡(如 STED、SIM、(F) PALM、(D) STORM)和熒光相關(guan) 光譜(FCS)等顯微鏡技術 。
培養(yang) 皿檢查:收到培養(yang) 皿後,檢查包裝是否完好,單個(ge) 培養(yang) 皿有無破損、汙染跡象 。確認產(chan) 品規格、表麵處理類型(如 ibiTreat、uncoated、bioinert 等)是否與(yu) 實驗需求相符 。
試劑與(yu) 耗材準備:
細胞培養(yang) 基:根據所培養(yang) 細胞類型,選擇合適的培養(yang) 基,並添加相應的血清、抗生素、生長因子等成分 。培養(yang) 基需提前過濾除菌,確保無菌狀態 。
細胞:複蘇凍存細胞或從(cong) 培養(yang) 瓶中消化獲取對數生長期細胞,製成細胞懸液 。通過細胞計數確定合適的接種密度。
其他耗材:準備無菌移液器吸頭、移液管、離心管、鑷子等耗材,所有耗材需保證無菌 。若需對培養(yang) 皿進行額外包被(如使用 ECM 蛋白包被未處理表麵的培養(yang) 皿),準備相應包被試劑 。
ibiTreat 表麵培養(yang) 皿:對於(yu) 需在 ibiTreat 表麵培養(yang) 的細胞,直接將適量細胞懸液加入培養(yang) 皿中 。例如,若細胞接種密度為(wei) 每平方厘米 1×10⁵個(ge) 細胞,對於(yu) 生長麵積 3.5cm² 的 µ-Dish 35 mm 高壁培養(yang) 皿,可加入含有 3.5×10⁵個(ge) 細胞的細胞懸液 。輕輕晃動培養(yang) 皿,使細胞均勻分布,避免產(chan) 生氣泡,然後將培養(yang) 皿放入 37℃、5% CO₂的細胞培養(yang) 箱中孵育 。
未處理表麵培養(yang) 皿(若需包被):若使用未處理的疏水表麵培養(yang) 皿且需進行 ECM 蛋白包被,先將包被試劑(如多聚賴氨酸、纖連蛋白等)稀釋至合適濃度 。取適量稀釋後的包被試劑加入培養(yang) 皿,確保液體(ti) 均勻覆蓋底部表麵,室溫孵育 1-2 小時或按照試劑說明書(shu) 要求的時間孵育 。孵育結束後,用無菌 PBS 衝(chong) 洗培養(yang) 皿 2-3 次,去除未結合的包被試劑,然後進行細胞接種,接種方法同 ibiTreat 表麵培養(yang) 皿 。
bioinert 表麵培養(yang) 皿:對於(yu) 培養(yang) 懸浮細胞、球體(ti) 或類器官的 bioinert 表麵培養(yang) 皿,直接將細胞懸液或含有細胞聚集體(ti) 的溶液加入培養(yang) 皿 。同樣輕輕晃動使分布均勻後放入培養(yang) 箱 。由於(yu) 細胞不會(hui) 粘附在 bioinert 表麵,在操作和觀察過程中需注意避免溶液過度晃動導致細胞聚集體(ti) 位置改變 。
日常培養(yang) :將接種細胞後的培養(yang) 皿放入細胞培養(yang) 箱,定期觀察細胞生長狀態 。根據細胞生長速度,每隔 1-2 天更換一次培養(yang) 基,去除細胞代謝產(chan) 物,補充營養(yang) 物質 。觀察細胞時,可在倒置顯微鏡下直接觀察培養(yang) 皿中的細胞,注意細胞形態、密度變化等 。
顯微鏡成像:
熒光顯微鏡成像:若進行熒光染色實驗,當細胞生長至合適階段,按照免疫熒光染色流程進行操作 。包括固定細胞(如使用 4% 多聚甲醛固定 15-20 分鍾)、通透處理(0.1% Triton X-100 處理 10 分鍾)、封閉(5% BSA 封閉 30 分鍾)、一抗和二抗孵育等步驟 。染色完成後,用 PBS 清洗幹淨,直接在熒光顯微鏡下觀察 。由於(yu) ibidi µ-Dish 35 mm 高壁培養(yang) 皿底部的低自發熒光特性,可獲得清晰的熒光圖像 。
其他顯微鏡成像:如需進行 TIRF、DIC 等特殊顯微鏡成像,根據相應顯微鏡的要求,將培養(yang) 皿放置在配套的載物台上 。對於(yu) 需使用特殊蓋子(如 DIC 蓋子)的實驗,在成像前更換為(wei) 相應蓋子 。調整顯微鏡參數,獲取高質量的細胞圖像 。
廢棄物處理:實驗結束後,含有細胞的培養(yang) 基、一次性耗材等廢棄物,按照生物安全廢棄物處理規範進行處理 。對於(yu) 可能含原體(ti) 或危險生物材料的廢棄物,需先進行高壓滅菌或化學消毒處理,然後丟(diu) 棄 。
培養(yang) 皿處理:若培養(yang) 皿為(wei) 一次性使用產(chan) 品,直接丟(diu) 棄至相應廢棄物容器 。若培養(yang) 皿可重複使用(但需確認產(chan) 品說明是否支持),先將培養(yang) 皿中的液體(ti) 倒出,用清水衝(chong) 洗幹淨,然後浸泡在合適的清潔劑溶液中,超聲清洗去除殘留細胞和雜質 。清洗後用蒸餾水衝(chong) 洗多次,烘幹備用 。但需注意,重複使用可能會(hui) 影響培養(yang) 皿的性能,尤其是底部的光學性能和表麵特性,對於(yu) 對實驗精度要求的實驗,建議使用新的培養(yang) 皿 。
培養(yang) 皿儲(chu) 存:未使用的培養(yang) 皿應儲(chu) 存在幹燥、清潔的環境中,避免陽光直射和高溫 。對於(yu) 已開封但未使用完的培養(yang) 皿,需密封保存,防止灰塵和微生物汙染 。
操作過程無菌要求:在整個(ge) 細胞培養(yang) 和實驗操作過程中,嚴(yan) 格遵守無菌操作規範 。在超淨工作台中進行操作,使用前用 75% 酒精擦拭台麵和雙手,對使用的耗材、試劑等進行表麵消毒 。避免交叉汙染,不同細胞係或實驗的操作應分開進行,使用不同的移液器和耗材 。
蓋子鎖扣使用:當需要減少液體(ti) 蒸發時(如在非加濕的顯微鏡載物台上進行長時間成像實驗),使用蓋子的鎖扣功能 。但在細胞培養(yang) 箱內(nei) 正常培養(yang) 時,無需一直使用鎖扣,以免影響氣體(ti) 交換 。
避免底部刮擦:在操作培養(yang) 皿過程中,注意避免尖銳物品刮擦底部,尤其是用於(yu) 高分辨率成像的聚合物蓋玻片底部或玻璃底部,刮擦可能會(hui) 導致底部光學性能下降,影響成像質量 。拿取培養(yang) 皿時,應手持培養(yang) 皿側(ce) 壁,避免接觸底部 。
特殊表麵使用注意:對於(yu) bioinert 表麵的培養(yang) 皿,由於(yu) 其阻止細胞粘附的特性,在加入細胞懸液後,盡量減少培養(yang) 皿的移動和晃動,以免細胞聚集體(ti) 分散 。同時,該表麵不能進行額外的蛋白包被等處理,需嚴(yan) 格按照其適用範圍使用 。