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準備工作
配製適量的台盼藍染液,一般使用 0.4% 的台盼藍溶液,可將 0.4 克台盼藍粉末溶解於(yu) 100 毫升磷酸緩衝(chong) 鹽溶液(PBS)中,過濾除菌後備用。
準備好細胞懸液,確保細胞懸液濃度適中,若細胞濃度過高,需進行適當稀釋。
染色
取適量細胞懸液(如 100 微升),加入等體(ti) 積的台盼藍染液(100 微升),輕輕吹打混勻,使細胞與(yu) 染液充分接觸,室溫下染色 3 - 5 分鍾。
觀察與(yu) 計數
取少量染色後的細胞懸液,滴加到血細胞計數板上,蓋上蓋玻片。
在顯微鏡下觀察,活細胞由於(yu) 細胞膜具有完整性,能夠排斥台盼藍,因此不著色,呈現透明狀;而死細胞的細胞膜失去完整性,台盼藍可進入細胞內(nei) ,使細胞染成藍色。
選擇計數板上合適的區域進行細胞計數,一般選取四個(ge) 角的大方格和中央的大方格進行計數。分別記錄活細胞(無色)和死細胞(藍色)的數量。
計算細胞活性
根據以下公式計算細胞活性:細胞活性(%)=(活細胞數 / 細胞總數)×100%。例如,計數得到活細胞數為(wei) 400 個(ge) ,死細胞數為(wei) 100 個(ge) ,則細胞總數為(wei) 500 個(ge) ,細胞活性 =(400/500)×100% = 80%。
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