Qiagen Ni - NTA Superflow (500 ml)：高效蛋白純化的得力工具

核心技術：Ni - NTA Superflow 的核心技術基於(yu) 鎳離子（Ni²⁺）與(yu) 帶有多聚組氨酸標簽（His - Tag）的蛋白質之間的特異性親(qin) 和作用。該產(chan) 品中的 Ni - NTA（次氮基三乙酸鎳）配體(ti) 通過共價(jia) 鍵結合到高度交聯的瓊脂糖凝膠介質上，形成穩定且高效的親(qin) 和吸附位點。這種的設計使得它能夠特異性地識別並結合含有 His - Tag 的重組蛋白，實現從(cong) 複雜的生物樣品中精準分離目標蛋白。

規格優(you) 勢：500 ml 的大容量包裝，適用於(yu) 中大規模的蛋白純化實驗需求。無論是在科研機構進行的頻繁蛋白純化項目，還是生物技術公司的小試、中試生產(chan) 階段，該規格都能在保證實驗連貫性的同時，降低單位成本，提高實驗效率，減少因頻繁更換小包裝試劑帶來的操作誤差與(yu) 時間浪費。

結合過程：當含有 His - Tag 蛋白的樣品溶液通過填充有 Ni - NTA Superflow 介質的層析柱時，His - Tag 中的組氨酸殘基會(hui) 與(yu) 介質表麵的 Ni²⁺離子發生配位作用，形成穩定的絡合物。在生理條件下，這種相互作用具有高度的特異性和親(qin) 和力，能夠有效地將目標蛋白從(cong) 其他雜質蛋白中分離出來。而樣品中的其他無 His - Tag 的蛋白質則不會(hui) 與(yu) 介質結合，直接流穿層析柱。

洗脫過程：結合在介質上的 His - Tag 蛋白可通過改變洗脫緩衝(chong) 液的條件進行洗脫。常用的方法是在洗脫緩衝(chong) 液中加入咪唑，咪唑與(yu) Ni²⁺離子具有相似的配位能力，能夠競爭(zheng) 性地結合到 Ni - NTA 配體(ti) 上，從(cong) 而將 His - Tag 蛋白從(cong) 介質上置換下來。通過逐步增加洗脫緩衝(chong) 液中咪唑的濃度，可以實現對不同親(qin) 和力的 His - Tag 蛋白的分步洗脫，提高蛋白純化的分辨率。

高載量與(yu) 高流速：Ni - NTA Superflow 介質具有出色的物理性能，其載量高達 20mg/ml ，相比一些傳(chuan) 統的 Ni - NTA 瓊脂糖介質（載量約 10mg/ml），能夠處理更多量的目標蛋白，大大提高了單次純化實驗的效率。同時，該介質可以耐受更高的壓力（最高可達 140psi，即 10bar），允許更快的流速，最大流速可達 20ml/min 。這種高流速特性使得在保證純化效果的前提下，能夠顯著縮短蛋白純化所需的時間，尤其適用於(yu) 對實驗進度要求較高的項目。

廣泛的兼容性：該產(chan) 品能夠耐受多種實驗條件，無論是在天然條件下進行蛋白質的純化，以保持其生物活性和天然構象；還是在變性條件下，如使用 8M 尿素或 6M 鹽酸胍等變性劑，用於(yu) 純化那些在天然狀態下難以溶解或易聚集的蛋白質，Ni - NTA Superflow 都能發揮良好的作用。此外，它還可以耐受一定濃度的還原劑，如 20mM 的巰基乙醇或者 10mM 的 DTT，這對於(yu) 一些含有二硫鍵、需要在還原環境下保持活性的蛋白質純化尤為(wei) 重要，拓寬了其在不同類型蛋白純化實驗中的應用範圍。

簡便的操作與(yu) 良好的重複性：使用 Ni - NTA Superflow 進行蛋白純化的操作相對簡便，隻需將澄清的細菌裂解物等樣品直接上柱，經過簡單的洗滌和洗脫步驟，即可一步純化出帶有 His - Tag 的融合蛋白。對於(yu) 預裝柱形式的 Ni - NTA Superflow 產(chan) 品，更是省掉了自裝柱子的繁瑣過程，避免了因裝柱不當導致的氣泡、裂縫、幹柱等問題，確保每次實驗結果的穩定性和重複性。同時，優(you) 化後的 Ni - NTA Superflow 預裝柱再生非常方便，僅(jin) 需用 NaOH 溶液流過處理 30 分鍾即可再次使用，大大降低了實驗成本。

準備工作：根據實驗需求選擇合適的層析柱，若使用 500 ml 的 Ni - NTA Superflow 散裝填料，則需進行裝柱操作，確保柱子裝填均勻、無氣泡。用適量的平衡緩衝(chong) 液（通常為(wei) 含有一定濃度鹽離子和緩衝(chong) 劑的溶液，如 pH 7.4 的 PBS 緩衝(chong) 液）對柱子進行平衡，直至流出液的 pH 值和電導率與(yu) 平衡緩衝(chong) 液一致。同時，準備好待純化的含有 His - Tag 蛋白的樣品，確保樣品澄清，可通過離心或過濾等方式去除雜質顆粒。

上樣與(yu) 結合：將準備好的樣品緩慢加入到平衡後的層析柱中，控製流速，使樣品能夠充分與(yu) Ni - NTA Superflow 介質接觸，目標 His - Tag 蛋白與(yu) 介質上的 Ni²⁺離子發生特異性結合。在此過程中，可通過監測流出液的紫外吸收值（通常在 280nm 波長處）來判斷蛋白結合情況，當流出液的紫外吸收值恢複到基線水平時，表明樣品上樣完成。

洗滌：用洗滌緩衝(chong) 液（一般為(wei) 含有較低濃度咪唑的平衡緩衝(chong) 液）對柱子進行洗滌，去除未結合的雜質蛋白以及與(yu) 介質結合較弱的非特異性物質。洗滌過程中持續監測流出液的紫外吸收值，直至吸收值穩定在較低水平，說明洗滌充分。

洗脫：更換為(wei) 含有較高濃度咪唑的洗脫緩衝(chong) 液，按照設定的流速進行洗脫，His - Tag 蛋白會(hui) 被逐步洗脫下來。收集洗脫液，可通過 SDS - PAGE 電泳等方法對洗脫峰中的蛋白進行檢測，確定目標蛋白所在的洗脫組分。

日常維護：在每次使用後，應及時對層析柱進行清洗。先用去離子水衝(chong) 洗柱子，去除殘留的緩衝(chong) 液和鹽離子，然後用含有一定濃度 NaOH 的溶液進行清洗，以去除可能殘留的蛋白質和微生物汙染。對於(yu) 預裝柱，按照產(chan) 品說明書(shu) 進行再生處理，確保柱子的性能能夠得到有效恢複。

儲(chu) 存條件：Ni - NTA Superflow 應儲(chu) 存於(yu) 2 - 8°C 的環境中，避免陽光直射。若為(wei) 散裝填料，在儲(chu) 存時應確保其始終處於(yu) 含有防腐劑（如 0.02% 的緩衝(chong) 液中，防止微生物生長。對於(yu) 預裝柱，應保持其包裝密封完好，防止柱子幹燥，影響其性能。

科研機構的基礎研究：在某高校的生物化學實驗室中，研究人員利用 Ni - NTA Superflow (500 ml) 對新發現的一種具有潛在抗腫瘤活性的 His - Tag 融合蛋白進行純化。通過優(you) 化上樣、洗滌和洗脫條件，成功獲得了高純度的目標蛋白，純度經檢測達到 95% 以上。後續利用該純化後的蛋白進行的結構解析和功能驗證實驗，為(wei) 深入研究該蛋白的作用機製奠定了堅實基礎。

生物技術公司的產(chan) 品研發：一家專(zhuan) 注於(yu) 生物製藥的公司，在研發一款基於(yu) 重組蛋白的新型藥物時，使用 Ni - NTA Superflow 進行大規模的蛋白純化工藝開發。憑借其高載量和高流速的優(you) 勢，在保證產(chan) 品質量的前提下，大幅提高了生產(chan) 效率，降低了生產(chan) 成本，加速了產(chan) 品從(cong) 研發到臨(lin) 床前試驗的進程 。