如何正確使用UElandy PCR清潔試劑盒？

準備工作：在開始使用 UElandy PCR 清潔試劑盒前，要先確認實驗設備和試劑狀態。對於(yu) 負壓法，需正確連接負壓裝置，並將 96 孔 DNA 製備板置於(yu) 其上；若采用離心法，則準備好離心機和配套的 96 孔 1.6 ml 深孔板。同時，按試劑瓶上指定體(ti) 積，往 Buffer W2 concentrate 中加入無水乙醇（可用無水乙醇或 95% 乙醇），並充分混合均勻，以此獲得用於(yu) 洗滌的 Buffer W2 。

結合反應：在 PCR、酶切、酶標或測序反應液中，加入 3 倍體(ti) 積的 Buffer PCR - A。如果 Buffer PCR - A 的用量不足 100μl，需將其加至 100μl。隨後，充分混合均勻，確保反應液與(yu) Buffer PCR - A 融合。接著，將混合液轉移到 96 孔 DNA 製備板中。對於(yu) 負壓法，開啟負壓裝置，並調節負壓至 - 25 - 30 英寸汞柱，緩慢吸掉板中的溶液，促使 DNA 牢固結合在矽膠膜上；離心法則是將 96 孔 DNA 製備板置於(yu) 96 孔 1.6 ml 深孔板中，以 1000 x g 離心 1 min，棄去濾液，實現 DNA 與(yu) 矽膠膜的結合 。

洗滌步驟：向 96 孔 DNA 製備板中加入 0.3 ml Buffer W2。負壓法下，再次開啟負壓吸盡管中溶液；離心法是以 1000 x g 離心 1 min，棄去濾液。此洗滌步驟需重複兩(liang) 次，從(cong) 而清除結合在矽膠膜上的鹽分及其他小分子雜質 。

幹燥處理：負壓法需保持負壓狀態，將 96 孔 DNA 製備板抽吸 10 min，盡量去除殘留液體(ti) ，之後將導流管朝下，在長纖維性紙巾上用力拍擊 6 次，進一步排除可能殘留的液體(ti) ；離心法是將 96 孔 DNA 製備板再次置於(yu) 96 孔 1.6 ml 深孔板中，以 3000 x g 離心 10 min，盡可能去除殘留液體(ti) ，為(wei) 後續洗脫做準備 。

洗脫 DNA：將 96 孔 DNA 製備板置於(yu) 96 孔 V 型底板上，在膜正中央加入 25 - 30μl 水或 Eluent，室溫靜置 1 min，使洗脫液充分浸潤矽膠膜。隨後，以 3000 x g 離心 5 min，將純化後的 DNA 洗脫到 V 型底板中。此時，便可獲得高純度的 PCR 產(chan) 物，用於(yu) 後續的限製性酶切、連接反應、分子雜交以及自動化熒光測序等實驗 。

注意事項：使用過程中，務必嚴(yan) 格按照試劑盒說明書(shu) 進行試劑添加與(yu) 操作條件控製。比如，Buffer W2 concentrate 使用前加入無水乙醇的操作必須準確無誤；進行洗脫時，若將洗脫液或水加熱至 65℃，能夠有效提高洗脫效率；考慮到 DNA 分子呈酸性，建議將純化後的 DNA 保存在 2.5 mM Tris - HCl，pH 8.5 的洗脫液中，以維持 DNA 的穩定性 。