使用 SDS-PAGE 一步法凝膠快速製備試劑盒時,還可從環境、設備清潔、試劑特性等角度把控細節,進一步保障實驗質量:
環境因素把控
濕度控製:環境濕度對凝膠聚合有潛在影響,在高濕度環境下,凝膠表麵易吸收水分,導致凝膠邊緣出現模糊、不規則現象,影響電泳結果。建議在相對濕度 40%-60% 的環境中進行凝膠製備,若實驗室濕度較高,可使用除濕設備調節。
氣流影響:製備凝膠時應避免在通風櫥強氣流下或風扇直吹的環境中操作,強氣流會(hui) 加速凝膠溶液表麵水分蒸發,造成凝膠表麵幹裂,還可能使凝膠溶液產(chan) 生波動引入氣泡,影響凝膠均一性。
設備深度清潔
電泳槽定期維護:電泳槽使用後,需清洗殘留的緩衝(chong) 液和凝膠碎屑。長期不清理,殘留物質會(hui) 附著在電泳槽內(nei) 壁,影響後續凝膠灌注的平滑度,甚至可能與(yu) 凝膠發生反應,導致條帶異常。清洗時可用溫和的去汙劑浸泡,再用大量蒸餾水衝(chong) 洗幹淨,晾幹備用。
移液槍校準與(yu) 清潔:定期對移液槍進行校準,確保量取試劑體(ti) 積準確。同時,每次使用後及時清理移液槍槍頭殘留試劑,避免幹涸堵塞,若移液槍不慎接觸汙染試劑,需拆卸進行深度清潔,防止交叉汙染影響凝膠製備。
試劑特性利用
觀察試劑顏色變化:部分試劑盒中的預混試劑可能含有顯色劑,用於(yu) 指示試劑是否變質或成分是否正常。使用前觀察試劑顏色,若與(yu) 標準顏色存在明顯差異,如褪色、變色等,可能表明試劑失效,應謹慎使用。
利用試劑密度差異:在灌注凝膠時,若凝膠溶液與(yu) 電泳槽壁之間存在小氣泡難以去除,可利用溶液密度差異。用微量移液器吸取少量密度稍大的甘油溶液,沿氣泡邊緣緩慢注入,甘油會(hui) 將氣泡擠出,且甘油對凝膠聚合和電泳過程無明顯不良影響。