上樣緩衝液是一個較為寬泛的概念,用於在電泳實驗中輔助樣品上樣;而 SDS - PAGE 變性蛋白上樣緩衝液是針對 SDS - PAGE 電泳中蛋白質樣品設計的專用上樣緩衝液,二者在組成、作用和適用範圍上存在明顯區別:
組成成分
上樣緩衝(chong) 液:一般包含甘油或蔗糖等密度調節劑,用於(yu) 增加樣品密度,使樣品能沉入加樣孔,防止樣品在電泳緩衝(chong) 液中擴散;還含有溴酚藍、二甲苯青 FF 等指示劑,便於(yu) 觀察電泳進程。但不同類型的電泳,其基礎上樣緩衝(chong) 液成分可能有所差異,一些簡單的核酸電泳上樣緩衝(chong) 液可能僅(jin) 由甘油和指示劑組成 。
SDS - PAGE 變性蛋白上樣緩衝(chong) 液:除了含有甘油和溴酚藍,還包含 SDS 和 β - 巰基乙醇(或二硫蘇糖醇 DTT)等特殊成分。SDS 是陰離子去汙劑,能使蛋白質變性並帶上大量負電荷;β - 巰基乙醇或 DTT 作為(wei) 強還原劑,可切斷蛋白質中的二硫鍵,讓蛋白質充分伸展為(wei) 線性分子,此外還含有 Tris - HCl 緩衝(chong) 體(ti) 係維持 pH 穩定。
作用機製
上樣緩衝(chong) 液:主要作用是輔助樣品在電泳加樣時能準確進入加樣孔,並通過指示劑遷移大致判斷電泳進度,對樣品本身的結構和性質通常沒有明顯改變(如在核酸電泳中,不會(hui) 使核酸變性)。
SDS - PAGE 變性蛋白上樣緩衝(chong) 液:不僅(jin) 具備上樣緩衝(chong) 液的基本功能,更重要的是使蛋白質變性。通過 SDS 與(yu) 蛋白質結合、β - 巰基乙醇或 DTT 破壞二硫鍵,消除蛋白質的電荷和空間結構差異,使蛋白質僅(jin) 依據分子量大小在電泳中分離,為(wei) 後續分析蛋白質分子量、純度等提供基礎。
適用範圍
上樣緩衝(chong) 液:適用範圍廣,可用於(yu) 核酸電泳(如瓊脂糖凝膠電泳分離 DNA、RNA)、蛋白質非變性電泳等多種電泳實驗,不同電泳類型需搭配相應的電泳緩衝(chong) 液和凝膠體(ti) 係使用。
SDS - PAGE 變性蛋白上樣緩衝(chong) 液:專(zhuan) 門適用於(yu) SDS - PAGE 電泳分離蛋白質,不適用於(yu) 需要保持蛋白質天然結構和活性的實驗,如蛋白質活性分析、蛋白質 - 蛋白質相互作用研究等非變性電泳實驗場景。