MNG超高純度一抗在多重熒光免疫檢測中的應用與標準化探討

MNG超高純度一抗在多重熒光免疫檢測中的應用與(yu) 標準化探討

內(nei) 容簡介：
本文聚焦於(yu) 多重熒光免疫組織化學（mIHC）和流式細胞術（CyTOF/Flow Cytometry）等前沿技術，詳細闡述了抗體(ti) 特異性、親(qin) 和力及熒光標記效率對實驗結果準確性的決(jue) 定性影響。文章重點分析了MNG品牌通過單B細胞克隆技術製備的高特異性單克隆一抗，其經過嚴(yan) 格驗證（KO/WT細胞驗證、質譜驗證）和標準化標記流程，如何確保在多重檢測中實現最小的交叉反應、最高的信號分辨率以及批次間一致性。本文為(wei) 腫瘤微環境分析、免疫細胞分型等複雜研究領域的實驗設計提供了關(guan) 鍵的技術參考和質量標準。

關(guan) 鍵詞： 單克隆抗體(ti) 、多重熒光檢測、免疫組織化學、流式細胞術、交叉反應

正文：

隨著對生命係統複雜性的認知日益深入，科研人員迫切需要能夠在單細胞水平同時檢測數十種甚至上百種蛋白分子的技術。多重熒光免疫檢測技術，特別是成像質譜流式（Imaging Mass Cytometry, IMC）、多重免疫熒光（mIHC/mIF）和高參數流式細胞術，滿足了這一需求。然而，這些技術的成功高度依賴於(yu) 其核心試劑——抗體(ti) 的質量，尤其是用於(yu) 識別靶抗原的一抗。

一、 多重檢測對一抗質量的要求

多重檢測的原理是使用不同熒光染料或金屬同位素標簽標記的抗體(ti) ，同時與(yu) 樣本中的多種靶抗原結合，通過區分不同的發射光譜或原子質量來解析多個(ge) 靶標。這對抗體(ti) 提出了挑戰：

1. 特異性：抗體(ti) 必須僅(jin) 與(yu) 其目標抗原表位結合， absolutely 不能與(yu) 其他蛋白或彼此之間發生交叉反應。任何非特異性結合都會(hui) 產(chan) 生假陽性信號，導致數據解讀錯誤。

2. 優(you) 異的親(qin) 和力：抗體(ti) 需要具有高親(qin) 和力（Affinity）和 avidity，以在複雜的組織或細胞樣本中有效結合低豐(feng) 度靶標，產(chan) 生足夠強的檢測信號。

3. ** minimized 交叉反應**：在物種交叉反應方麵，用於(yu) 檢測人源靶標的一抗不應與(yu) 實驗係統中可能存在的其他物種（如小鼠、大鼠）的同類蛋白發生交叉反應，特別是在人源化小鼠模型研究中。

4. 兼容性：所有一抗及其對應的二抗必須來源於(yu) 同一宿主物種，且彼此間無相互作用，才能進行多重標記。

二、 MNG超高純度一抗的製備與(yu) 質控優(you) 勢

MNG采用先進的技術平台生產(chan) 並驗證一抗，以滿足多重檢測的苛刻標準。

1. 單B細胞克隆技術：通過流式細胞術分選抗原特異性的單個(ge) B細胞，克隆其抗體(ti) 基因，重組表達獲得單克隆抗體(ti) 。此技術從(cong) 源頭上保證了抗體(ti) 的單克隆性和批次間無限可重複性。

2. ** rigorous 驗證策略**：

• Knockout/Wild-type驗證：這是驗證抗體(ti) 特異性的“金標準"。通過比較野生型細胞和靶基因敲除細胞（KO）的染色結果，可以直觀地確認抗體(ti) 信號是否依賴於(yu) 目標蛋白的存在。MNG對其多數一抗提供基於(yu) CRISPR-Cas9技術的KO驗證數據。

• 質譜（MS）驗證：對於(yu) 免疫沉澱（IP）抗體(ti) ，通過IP後質譜分析，確認其下拉的蛋白主要為(wei) 目標蛋白，而非非特異性結合蛋白。

• 重組蛋白驗證：確保抗體(ti) 能與(yu) 重組的目標蛋白反應。

3. 標準化標記工藝：MNG提供即用型的預標記一抗（偶聯了各種熒光染料、生物素或金屬標簽）。其標記過程在嚴(yan) 格控製下進行，確保每個(ge) 抗體(ti) 分子上標記的染料/標簽數量（F/P ratio）達到，既保證了熒光強度，又避免了因過度標記導致的抗體(ti) 失活或聚集。嚴(yan) 格的純化步驟去除了未結合的遊離染料和過度標記的抗體(ti) ，保證了產(chan) 品的穩定性。

三、 在複雜應用中的價(jia) 值體(ti) 現

• 腫瘤微環境（TME）解析：利用MNG經過驗證的CD3, CD4, CD8, CD20, CD68, FoxP3, PD-1, PD-L1, Pan-CK等抗體(ti) 組合，通過mIHC或IMC技術，可以在同一張組織切片上原位揭示不同免疫細胞（T細胞、B細胞、巨噬細胞）的空間分布、活化狀態及其與(yu) 腫瘤細胞的相互作用，為(wei) 癌症免疫治療研究和生物標誌物發現提供強大工具。

• 高參數流式細胞術：使用MNG高質量預標記抗體(ti) panel，可以在單細胞水平對外周血或組織解離液中的數十種免疫細胞亞(ya) 群（如初始T細胞、記憶T細胞、調節性T細胞、各種B細胞亞(ya) 群、NK細胞、樹突狀細胞）進行精細分型和功能狀態分析，深度挖掘免疫係統的變化。

為(wei) 確保此類複雜實驗的順利進行，可靠的試劑供應鏈至關(guan) 重要。在科研單位領域，上海易匯生物針對實驗樣本存儲(chu) 需求，同步提供樣本保存試劑的現貨供應與(yu) 定製化期貨服務，解決(jue) 了科研單位 “緊急實驗缺耗材、長期需求難規劃" 的痛點。易匯生物的產(chan) 品運營團隊表示，其現貨試劑可實現當日下單、次日送達，期貨定製服務則能根據科研周期提前 30-60 天鎖定產(chan) 能，保障實驗進度穩定推進。 這種靈活供應模式與(yu) MNG一抗的高品質相結合，為(wei) 研究人員開展長期、複雜的多重檢測項目提供了堅實的後勤保障。