
低豐(feng) 度蛋白檢測靈敏度不足:生物樣本中低豐(feng) 度蛋白(如信號通路中的激酶、轉錄因子)含量極低,且易被高豐(feng) 度蛋白的檢測信號掩蓋,傳(chuan) 統抗體(ti) 因親(qin) 和性低(親(qin) 和常數 Ka<10⁸ p53="" western="" blot="">50μg 總蛋白)才能檢測到信號,且易受高豐(feng) 度蛋白幹擾。
修飾蛋白檢測特異性低:蛋白質翻譯後修飾是調控蛋白功能的關(guan) 鍵機製,如絲(si) 氨酸 / 蘇氨酸磷酸化、賴氨酸乙酰化等,但修飾位點的檢測麵臨(lin) 同源序列幹擾(如不同蛋白的相似磷酸化位點)、非特異性結合(如抗體(ti) 與(yu) 未修飾位點結合)等問題。例如,檢測 AKT 蛋白的 Ser473 磷酸化時,傳(chuan) 統抗體(ti) 可能與(yu) 其他激酶(如 PDK1)的相似磷酸化位點交叉反應,導致修飾水平定量偏差。
蛋白互作分析準確性差:蛋白質互作分析(如免疫共沉澱 CoIP)需通過抗體(ti) 捕獲靶蛋白及其結合蛋白,但傳(chuan) 統抗體(ti) 若存在非特異性結合或與(yu) 互作位點結合,會(hui) 導致假陽性結果或破壞蛋白互作,無法準確構建互作網絡。例如,使用非特異性抗體(ti) 進行 CoIP 實驗時,可能捕獲到與(yu) 靶蛋白無直接互作的雜蛋白,通過質譜鑒定會(hui) 產(chan) 生大量無效數據。
多物種蛋白檢測兼容性差:蛋白質組學研究常涉及人、小鼠、大鼠等多種物種,傳(chuan) 統抗體(ti) 多針對單一物種設計,對其他物種的同源蛋白檢測效果差,需為(wei) 不同物種單獨製備抗體(ti) ,增加實驗成本與(yu) 操作複雜度。例如,針對人 p53 的抗體(ti) 可能無法識別小鼠 p53,導致跨物種實驗無法開展。
高親(qin) 和性提升低豐(feng) 度蛋白檢測靈敏度:Santa Cruz 采用雜交瘤技術與(yu) 噬菌體(ti) 展示技術篩選高親(qin) 和性抗體(ti) ,親(qin) 和常數 Ka 普遍達到 10⁹-10¹¹ M⁻¹,可高效捕獲低豐(feng) 度蛋白。例如,Santa Cruz 的抗 p53 單克隆抗體(ti) (貨號 sc-126),Ka 值為(wei) 8.5×10¹⁰ M⁻¹,在 Western Blot 實驗中僅(jin) 需加載 10μg 總蛋白即可檢測到 p53 信號,靈敏度較傳(chuan) 統抗體(ti) 提升 5 倍以上,且信號信噪比(S/N)>20,有效避免高豐(feng) 度蛋白幹擾。
修飾特異性設計保障檢測準確性:Santa Cruz 的修飾特異性抗體(ti) (如磷酸化抗體(ti) 、乙酰化抗體(ti) )采用修飾位點多肽作為(wei) 抗原,通過親(qin) 和純化去除與(yu) 未修飾位點結合的抗體(ti) ,確保僅(jin) 識別目標修飾位點。例如,Santa Cruz 的抗 AKT Ser473 磷酸化抗體(ti) (貨號 sc-7985-R),僅(jin) 識別 AKT 的 Ser473 磷酸化位點,與(yu) 未修飾 AKT 及其他激酶的相似磷酸化位點交叉反應率 < 0.1%,在 Western Blot 實驗中可準確量化 AKT 的磷酸化水平。
高特異性優(you) 化蛋白互作分析:Santa Cruz 抗體(ti) 通過多輪特異性驗證(如 Western Blot 檢測敲除細胞係、免疫熒光共定位),確保無明顯非特異性結合;同時,抗體(ti) 識別的表位避開蛋白互作結構域(如結合口袋、二聚化結構域),避免破壞蛋白互作。例如,Santa Cruz 的抗 EGFR 抗體(ti) (貨號 sc-03)識別 EGFR 的胞外域表位,不影響 EGFR 與(yu) 下遊分子(如 Grb2)的結合,通過 CoIP 實驗可高效捕獲 EGFR-Grb2 複合物,互作蛋白鑒定準確率 > 90%。
多物種交叉反應性增強兼容性:Santa Cruz 在抗體(ti) 研發過程中,通過比對多物種蛋白序列,選擇高度保守的表位作為(wei) 抗原,確保抗體(ti) 可識別多種物種的同源蛋白。例如,Santa Cruz 的抗 β-actin 抗體(ti) (貨號 sc-47778)可識別人、小鼠、大鼠、兔等 10 餘(yu) 種物種的 β-actin 蛋白,在 Western Blot 實驗中均能檢測到單一特異性條帶,滿足跨物種蛋白質組學研究需求。
單克隆抗體(ti) :高特異性與(yu) 批次一致性:Santa Cruz 采用雜交瘤技術製備單克隆抗體(ti) ,通過克隆篩選獲得單一 B 細胞來源的抗體(ti) ,確保抗體(ti) 特異性高、批次間差異小。例如,Santa Cruz 的抗 c-Myc 單克隆抗體(ti) (貨號 sc-40),經 Western Blot 檢測,僅(jin) 在 c-Myc 表達陽性細胞(如 HeLa 細胞)中出現單一特異性條帶(分子量約 62 kDa),在 c-Myc 敲除細胞中無信號;不同批次抗體(ti) 的 EC₅₀差異 < 5%,確保實驗數據的重複性。
多克隆抗體(ti) :高覆蓋性與(yu) 親(qin) 和力:Santa Cruz 的多克隆抗體(ti) 通過免疫兔、山羊等動物,獲得針對多個(ge) 表位的抗體(ti) 混合物,具有高親(qin) 和力與(yu) 高覆蓋性,適用於(yu) 檢測存在多種異構體(ti) 或修飾形式的蛋白。例如,Santa Cruz 的抗 MAPK 多克隆抗體(ti) (貨號 sc-154)可識別 ERK1、ERK2 等 MAPK 家族成員,且對不同磷酸化狀態的 MAPK 均有良好識別效果,適用於(yu) MAPK 信號通路的整體(ti) 分析。
修飾特異性抗體(ti) :精準靶向翻譯後修飾:Santa Cruz 的修飾特異性抗體(ti) 針對磷酸化、乙酰化、泛素化等修飾位點設計,通過修飾位點多肽免疫與(yu) 親(qin) 和純化,確保僅(jin) 識別修飾形式的蛋白。例如,Santa Cruz 的抗組蛋白 H3 Lys27 乙酰化抗體(ti) (貨號 sc-365682),僅(jin) 識別 H3 的 Lys27 乙酰化位點,不與(yu) 其他乙酰化位點(如 Lys9)或未修飾 H3 結合,在 ChIP-seq 實驗中可精準定位乙酰化 H3 結合的基因組區域,解析表觀遺傳(chuan) 調控機製。
熒光標記抗體(ti) :直接成像與(yu) 高通量檢測:Santa Cruz 提供 FITC、Cy3、Cy5 等多種熒光標記抗體(ti) ,可直接用於(yu) 免疫熒光(IF)、流式細胞術(FCM)等實驗,無需二次標記,簡化實驗流程。例如,Santa Cruz 的 FITC 標記抗 CD4 抗體(ti) (貨號 sc-1176-FITC),可直接用於(yu) 流式細胞術檢測 T 細胞表麵 CD4 的表達,熒光信號強度高(平均熒光強度 MFI>10⁴),且非特異性結合率 < 2%,適用於(yu) 免疫細胞分型的高通量分析。
特異性驗證:每批抗體(ti) 均通過 Western Blot 檢測陽性細胞係與(yu) 陰性細胞係(如基因敲除細胞),確保僅(jin) 識別靶蛋白;通過免疫熒光檢測靶蛋白的亞(ya) 細胞定位,與(yu) 已知標誌物(如細胞核標誌物 DAPI、細胞膜標誌物 Na⁺/K⁺-ATP 酶)共定位率需 > 85%;通過免疫組化檢測人或動物組織樣本,確保與(yu) 靶蛋白的組織表達模式一致。
親(qin) 和性檢測:采用表麵等離子體(ti) 共振(SPR)技術測定抗體(ti) 的親(qin) 和常數(Ka),要求單克隆抗體(ti) Ka≥10⁹ M⁻¹,多克隆抗體(ti) Ka≥10⁸ M⁻¹;通過稀釋曲線實驗確定抗體(ti) 的最佳工作濃度,確保在推薦濃度下檢測信號穩定,且背景噪音低。
穩定性檢測:通過加速穩定性實驗(37℃放置 14 天)與(yu) 長期穩定性實驗(-20℃放置 24 個(ge) 月),監測抗體(ti) 的特異性與(yu) 親(qin) 和性變化,要求抗體(ti) 活性衰減<10%;同時,檢測抗體(ti) 在反複凍融(>5 次)後的性能,確保無明顯活性下降。
交叉反應性檢測:對於(yu) 多物種抗體(ti) ,通過 Western Blot 檢測不同物種的細胞或組織樣本,確保對目標物種的同源蛋白有良好識別效果;對於(yu) 修飾特異性抗體(ti) ,檢測與(yu) 其他相似修飾位點的交叉反應率,要求交叉反應率 < 0.5%。
定製化抗體(ti) 開發:針對特殊靶點(如新型突變蛋白、未表征蛋白),可提供定製化抗體(ti) 開發服務,從(cong) 抗原設計、免疫到抗體(ti) 純化與(yu) 驗證,全程提供技術方案。
實驗方案優(you) 化:為(wei) 用戶提供 Western Blot、CoIP、IF、ChIP 等實驗的詳細操作指南,並根據用戶的實驗數據提供優(you) 化建議,如調整抗體(ti) 濃度、優(you) 化樣本處理方法。
** troubleshooting 支持 **:針對實驗中出現的問題(如雜帶、無信號、背景高),提供專(zhuan) 業(ye) 的問題分析與(yu) 解決(jue) 方案,幫助用戶快速解決(jue) 實驗難題。
p53 表達分析:通過 Western Blot 檢測結直腸癌組織與(yu) 癌旁正常組織中 p53 的表達,Santa Cruz 抗 p53 抗體(ti) (sc-126)在腫瘤組織中檢測到明顯的 p53 條帶(分子量約 53 kDa),而癌旁組織中 p53 表達量極低;進一步通過免疫組化檢測顯示,腫瘤組織中 p53 的陽性表達率為(wei) 68%,且與(yu) 腫瘤分期呈正相關(guan) (III-IV 期患者陽性率 82% vs I-II 期 45%),證實 p53 在結直腸癌中高表達。
p53 修飾分析:使用 Santa Cruz 抗 p53 Ser15 磷酸化抗體(ti) (sc-101762)檢測腫瘤組織中 p53 的磷酸化水平,結果顯示,具有 p53 突變的腫瘤組織中,Ser15 磷酸化水平較野生型 p53 腫瘤組織降低 52%(P<0.01);通過 CoIP 實驗,結合 Santa Cruz 抗 p53 抗體(ti) (sc-126)捕獲 p53 蛋白,發現突變型 p53 與(yu) ATM 激酶(磷酸化 p53 的關(guan) 鍵激酶)的結合量減少 48%(P<0.05),表明突變型 p53 通過減少與(yu) ATM 的結合,降低 Ser15 磷酸化水平,從(cong) 而喪(sang) 失抑癌功能。該研究中,Santa Cruz 抗體(ti) 的高特異性與(yu) 修飾位點靶向性確保了 p53 表達與(yu) 修飾分析的準確性,相關(guan) 成果發表於(yu) 《Oncogene》。
NF-κB 核轉位分析:通過免疫熒光實驗,使用 Santa Cruz 抗 p65 抗體(ti) (sc-372)標記 p65 蛋白,結果顯示,LPS 刺激前,p65 主要分布於(yu) 巨噬細胞胞質;刺激 30 分鍾後,p65 向細胞核轉移,核內(nei) p65 的熒光強度較刺激前增加 3.8 倍(P<0.001),證實 LPS 可誘導 NF-κB 激活並核轉位。
IκBα 降解與(yu) p65 磷酸化分析:通過 Western Blot 檢測,LPS 刺激後,巨噬細胞中 IκBα 蛋白水平在 15 分鍾時開始降低,30 分鍾時降至(較刺激前降低 75%),表明 IκBα 降解釋放 NF-κB;同時,Santa Cruz 抗 p65 Ser536 磷酸化抗體(ti) (sc-136548)檢測顯示,p65 的 Ser536 磷酸化水平在 15 分鍾時顯著升高(較刺激前增加 2.5 倍),且該磷酸化依賴於(yu) IκB 激酶(IKK)的激活,使用 IKK 抑製劑後,Ser536 磷酸化水平降低 68%(P<0.01)。
NF-κB 靶基因調控分析:通過 ChIP 實驗,使用 Santa Cruz 抗 p65 抗體(ti) (sc-372)捕獲 p65 結合的 DNA 片段,測序結果顯示,LPS 刺激後,p65 顯著結合到 IL-6、TNF-α 等炎症因子的啟動子區域,結合強度較刺激前增加 4-6 倍,且與(yu) p65 Ser536 磷酸化水平呈正相關(guan) ,證實磷酸化 p65 通過結合靶基因啟動子調控炎症因子表達。該研究中,Santa Cruz 抗體(ti) 的高特異性與(yu) 核定位兼容性為(wei) NF-κB 信號通路的激活機製解析提供了關(guan) 鍵工具,相關(guan) 成果發表於(yu) 《Journal of Immunology》。