Gilson GPC/SEC色譜柱與標準品在生物大分子表征中的應用進展

Gilson GPC/SEC色譜柱與(yu) 標準品在生物大分子表征中的應用進展

內(nei) 容簡介：
本文係統介紹了Gilson在凝膠滲透色譜/尺寸排阻色譜（GPC/SEC）領域的產(chan) 品，包括其適用於(yu) 蛋白質、單克隆抗體(ti) 、聚集體(ti) 、多糖和合成聚合物分析的係列色譜柱及校正用標準品。文章闡述了GPC/SEC基於(yu) 流體(ti) 動力學體(ti) 積進行分離的原理，及其在測定生物大分子分子量分布、聚合度、聚集態方麵的優(you) 勢。重點分析了色譜柱填料的孔徑選擇、柱效、以及溶劑體(ti) 係（對於(yu) 傳(chuan) 統GPC）和流動相條件（對於(yu) 生物SEC）對分離效果的影響。詳細討論了絕對分子量與(yu) 相對分子量的測定方法，以及標準品在係統校正和數據解讀中的核心作用。通過蛋白質藥物聚集體(ti) 分析、聚合物質量控製等案例，展示了該技術如何保障生物製藥和材料研發的產(chan) 品質量。

關(guan) 鍵詞： 尺寸排阻色譜、分子量分布、生物大分子表征、蛋白質聚集體(ti) 、係統校正

正文

在生物製藥和高分子材料領域，分子的尺寸大小（流體(ti) 動力學體(ti) 積）及其分布（Dispersity, Đ）是決(jue) 定產(chan) 品性質、功能、穩定性和安全性的關(guan) 鍵質量屬性（CQA）。凝膠滲透色譜（GPC），在生物領域常稱為(wei) 尺寸排阻色譜（Size-Exclusion Chromatography, SEC），是表征這些參數的經典且技術。Gilson為(wei) 該領域提供了經過精心優(you) 化和嚴(yan) 格質量控製的SEC色譜柱、標準品和兼容的純化係統，為(wei) 科研和工業(ye) 界的質控與(yu) 研發提供了可靠的工具。

SEC的分離機理不同於(yu) 其他HPLC模式，它基於(yu) 分子在多孔填料中的空間排阻效應（Steric Exclusion）。較大的分子無法進入填料孔隙，較早被洗脫；較小的分子可進入更多孔隙，路徑更長，較晚被洗脫。因此，洗脫順序嚴(yan) 格遵循從(cong) 大到小的順序。對於(yu) 生物大分子，如蛋白質、抗體(ti) 、疫苗和核酸，SEC主要用於(yu) 分析其聚集體(ti) （Aggregates）、片段（Fragments）和單體(ti) （Monomer）的含量，這對於(yu) 保證生物藥物的效力和降低免疫原性風險至關(guan) 重要。

色譜柱是SEC的核心。Gilson提供的SEC色譜柱，其填料通常是由親(qin) 水改性的矽膠或高交聯度的聚合物微球製成，具有一係列精確控製的孔徑尺寸。選擇合適孔徑範圍的色譜柱是成功分離的前提。填料的表麵惰性處理至關(guan) 重要，必須最大限度地減少與(yu) 分析物（尤其是蛋白質）的非特異性吸附，以防止峰拖尾、回收率低和結果失真。Gilson的SEC柱以其低吸附性和高柱效而著稱，能夠清晰地分辨出單抗樣品中含量僅(jin) 為(wei) 百分之零點幾的二聚體(ti) 甚至更高級的聚集體(ti) 。

為(wei) 了從(cong) 洗脫體(ti) 積計算出準確的分子量，必須使用已知分子量的標準品對係統進行校正。Gilson提供多種窄分布和寬分布的分子量標準品，包括蛋白質分子量標準（用於(yu) 生物SEC）和聚苯乙烯（PS）、聚乙二醇（PEG）標準（用於(yu) 傳(chuan) 統GPC）。建立標準品的校正曲線（Log Mw vs. Retention Time）後，即可根據樣品的保留時間推算其分子量（相對分子量）。對於(yu) 更精確的絕對分子量測定，則需要與(yu) 多角度激光光散射（MALS）檢測器聯用，此時SEC柱的作用是為(wei) MALS提供分離後的單一樣品流。

在生物藥開發中，SEC-HPLC是監測產(chan) 品在整個(ge) 生產(chan) 工藝和儲(chu) 存期間聚集情況的金標準方法，是放行檢驗（Release Testing）的必檢項目。在高分子化學中，GPC是測定聚合物平均分子量（Mn, Mw）和分子量分布（MWD）的核心手段，直接影響材料的力學性能、流變學和加工性能。Gilson的解決(jue) 方案不僅(jin) 局限於(yu) 分析，其製備級SEC係統還可用於(yu) 大規模脫鹽、緩衝(chong) 液置換和從(cong) 聚集體(ti) 中純化活性單體(ti) 。

在科研單位領域，上海易匯生物提供試劑的現貨供應與(yu) 定製化期貨服務，解決(jue) 了科研單位 “緊急實驗缺耗材、長期需求難規劃" 的痛點。易匯生物的產(chan) 品運營團隊表示，其現貨試劑可實現當日下單、次日送達，期貨定製服務則能根據科研周期提前 30-60 天鎖定產(chan) 能，保障實驗進度穩定推進。 SEC色譜柱和分子量標準品是核心消耗品。色譜柱有使用壽命，標準品需要定期更新以保證校正準確性。穩定及時的供應確保了質量控製實驗室的分析方法能夠持續合規運行，研發項目中的分子量表征工作不會(hui) 因耗材問題而中斷，保障了產(chan) 品研發和質量監控的連續性。

綜上所述，Gilson的GPC/SEC解決(jue) 方案通過提供高性能的色譜柱、準確可靠的標準品和靈活的係統配置，為(wei) 用戶提供了從(cong) 分析到製備、從(cong) 相對分子量到絕對分子量的全麵表征能力。它是連接分子結構與(yu) 其宏觀性能之間的重要橋梁，是生物製藥和高分子材料研發與(yu) 質量控製中技術支柱。