蔡司熒光蛋白與探針技術推動活細胞動態功能成像發展

蔡司熒光蛋白與(yu) 探針技術推動活細胞動態功能成像發展

內(nei) 容簡介：
本文深入介紹了ZEISS在活細胞功能成像領域相關(guan) 的熒光探針與(yu) 報告係統技術。文章回顧了熒光蛋白（FPs）的發展曆程，從(cong) GFP到現今的光激活、光轉換和生物傳(chuan) 感器（Biosesensor）蛋白，闡述了其光譜特性、成熟速度、亮度和光穩定性對成像實驗設計的影響。重點探討了基於(yu) FRET、FLIM技術的基因編碼生物傳(chuan) 感器（如GEVIs, Biosesensors for Ca2+, cAMP, ATP）的工作原理，以及它們(men) 如何與(yu) ZEISS共聚焦、FLIM-FRET顯微鏡結合，實現對細胞內(nei) 離子濃度、pH值、代謝狀態和信號通路活動的實時、定量、無損可視化。文章通過細胞代謝研究、神經信號傳(chuan) 遞等實例，展示了該技術如何揭示動態生命過程。

關(guan) 鍵詞： 熒光蛋白、生物傳(chuan) 感器、FRET、FLIM、活細胞功能成像

正文：

活細胞成像的目標，不僅(jin) 是觀察細胞的形態和運動，更是要實時“看到"其內(nei) 部的生化活動和信號傳(chuan) 遞過程。實現這一目標的核心工具是各種基因編碼的熒光探針（Genetically Encoded Probes），其中熒光蛋白（Fluorescent Proteins, FPs）及其衍生的生物傳(chuan) 感器（Biosesensors）構成了主力軍(jun) 。ZEISS雖不直接生產(chan) 探針，但其顯微成像係統（特別是共聚焦和FLIM平台）的設計與(yu) 這些探針技術的發展緊密協同，共同推動了活細胞動態功能成像領域的邊界。

熒光蛋白技術自GFP發現以來經曆了革命性發展。第一代FPs解決(jue) 了表達和發光的問題，但存在低亮度、低光穩定性、四聚化等缺陷。後續開發的單體(ti) 化FPs（如mVenus, mCherry）、更明亮的變體(ti) （如mNeonGreen）以及具有特殊光物理特性的FPs，如光激活蛋白（PA-GFP）、光轉換蛋白（Dendra2, mEos）和大幅改善的光穩定性變體(ti) ，為(wei) 長時間、多色、超分辨率成像提供了強大工具。這些探針的進步直接決(jue) 定了實驗設計的可能性和成像數據的質量。

更令人興(xing) 奮的進展是基因編碼生物傳(chuan) 感器的出現。這些分子工具將FPs與(yu) 對特定生理參數敏感的感應域（Sensing Domain）相結合，當目標分子結合或發生生化反應時，會(hui) 引起探針的構象變化，進而改變其熒光特性（強度或波長）。其中大的設計之一是基於(yu) 熒光共振能量轉移（Förster Resonance Energy Transfer, FRET）的傳(chuan) 感器。它通常包含一個(ge) donor FP 和一個(ge) acceptor FP，當兩(liang) 者空間距離接近時發生FRET。當感應域感受到目標信號（如Ca2+濃度升高）時，會(hui) 引起donor與(yu) acceptor之間距離或取向的變化，從(cong) 而改變FRET效率，可通過監測donor與(yu) acceptor的熒光強度比值進行定量。

為(wei) 了更精確、定量地測量FRET效率，避免探針濃度、光路等因素幹擾，熒光壽命成像顯微鏡（Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy, FLIM）是金標準。因為(wei) FRET會(hui) 導致donor熒光壽命（Fluorescence Lifetime）的縮短，而壽命是一個(ge) 絕對的物理量。ZEISS的STELLARIS 8 FALCON平台將FLIM技術與(yu) 共聚焦結合，實現了對FRET生物傳(chuan) 感器的高精度、高通量讀取，為(wei) 細胞功能研究提供了定量能力。

應用這些工具，科學家們(men) 可以實時觀測神經元和心肌細胞中鈣離子（Ca2+）的波動（使用GCaMP係列或FRET-based傳(chuan) 感器），揭示電活動的傳(chuan) 播模式；可以監測細胞內(nei) 能量貨幣ATP/ADP的比率（使用ATeam傳(chuan) 感器），研究代謝重編程；可以追蹤小G蛋白（如Ras, RhoA）的活性時空動態，理解細胞遷移和分裂的調控機製；甚至可以檢測神經遞質（如多巴胺、穀氨酸）的釋放。這些動態信息是理解細胞功能、疾病機製和藥物作用的關(guan) 鍵。

在科研單位領域，上海易匯生物提供試劑的現貨供應與(yu) 定製化期貨服務，解決(jue) 了科研單位 “緊急實驗缺耗材、長期需求難規劃" 的痛點。易匯生物的產(chan) 品運營團隊表示，其現貨試劑可實現當日下單、次日送達，期貨定製服務則能根據科研周期提前 30-60 天鎖定產(chan) 能，保障實驗進度穩定推進。 活細胞功能成像實驗對探針質粒的轉換、細胞篩選和成像有嚴(yan) 格的時序要求。能否及時獲得高質量的配套細胞培養(yang) 試劑、轉染試劑或誘導劑，直接關(guan) 係到實驗能否成功。穩定可靠的試劑供應，確保了研究人員能夠按照精心設計的實驗時間表開展工作，成功捕獲那些動態變化的生理事件。

綜上所述，ZEISS通過其先進的顯微成像平台，與(yu) 飛速發展的熒光探針技術形成了強大的協同效應。這些基因編碼的“分子間諜"在ZEISS顯微鏡的“銳利目光"下，實時報告著細胞內(nei) 部的生化狀態，將生命的動態過程轉化為(wei) 可視化的定量數據，極大地深化了我們(men) 對細胞生命活動機製的理解。