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Cisbio Bioassays

Cisbio Bioassays公司所銷售的基於(yu) HTRF技術的產(chan) 品包括：IP1, cAMP, Cellul’erk 以及Tag-lite™細胞表麵受體(ti) 平台。這些業(ye) 務將會(hui) 通過IBA集團旗下的IBA中國分公司來操作。為(wei) 了在亞(ya) 洲市場拓展應用於(yu) 癌症診斷和治療方麵的放射藥物產(chan) 品、儀(yi) 器和方法, IBA集團於(yu) 2007年建立了IBA中國公司

HTRF 技術介紹

HTRF（均相時間分辨熒光）是用來檢測均相體(ti) 係中待測物的一種zui常用的方法，是用來研究藥物靶標的理想的平台。這種技術結合了熒光共振能量轉移（FRET） 和時間分辨技術（TR）。在TR-FRET實驗中，當供體(ti) 和受體(ti) 相離很近時，在供體(ti) 和受體(ti) 之間會(hui) 有熒光共振能量轉移而產(chan) 生信號。采用雙波長檢測能夠顯著減小緩衝(chong) 液和培養(yang) 基的幹擾，zui終的信號跟產(chan) 物形成的量成比例。

HTRF技術被廣泛應用於(yu) 基於(yu) 細胞實驗和生化實驗的藥物研發的不同階段，從(cong) 實驗開發，lead到hit，高通量篩選（HTS），到臨(lin) 床前研究。這是一種很靈敏且穩定的技術，可以使用384和1536孔板。自從(cong) 10年前HTRF技術進入藥物研發領域以來，研究者采用該技術加快了很多基於(yu) 抗體(ti) 的研究，包括GPCR（配體(ti) 結合，受體(ti) 二聚化，cAMP 和IP-1 的檢測，以及磷酸化ERK的定量）, 激酶，細胞因子和生物標誌物，生物過程（抗體(ti) 和蛋白生產(chan) ），以及蛋白和蛋白，蛋白和多肽，蛋白和DNA/RNA相互作用的實驗。HTRF技術也可以取代大部分ELISA，因為(wei) HTRF具有同等的檢測範圍和檢測極限，而且更節省實驗時間，並且不需要洗板的步驟。

HTRF也是基於(yu) TR-FRET的化學技術,但它的許多特點把它與(yu) 其他TR-FRET產(chan) 品區分開來。其中一個(ge) 特點就是由於(yu) 使用了鑭係元素，從(cong) 而具有非常長的半衰期（銪和鋱），鑭係元素與(yu) 絡合的穴相結合，這種結合的穴狀物與(yu) 其他所有TR-FRET產(chan) 品使用的螯合技術相比能增加實驗的穩定性，另外使用化的比值測量能矯正幹擾因素。其他HTRF ®技術的特點包括：

均質性（不需要洗板）
低背景
實驗體(ti) 積的小型化很簡捷
化合物和培養(yang) 基的幹擾小
對一些添加劑如DMSO和EDTA的耐受性
與(yu) 許多讀扳機相兼容
總體(ti) 而言，HTRF在生物分子檢測和定量方麵是相當靈敏和穩定的技術，可以廣泛應用於(yu) 藥物研發領域.

詳細技術特點

穴與(yu) 螯合物
穴的形成是將一個(ge) 陽離子納入到一個(ge) 立體(ti) 籠中。籠能收集光然後將能量轉移到核心的鑭係元素。這個(ge) 大環的這些性質有利於(yu) 跟鑭係元素緊密相連，這種不可破的連接會(hui) 形成異常穩固的複合體(ti) 。這種穴結構能抵抗一些特殊的實驗條件如大量存在的陽離子（Mg2 +和Mn2 +等），螯合物（EDTA），溶劑或者溫度。從(cong) HTRF 能應用到臨(lin) 床診斷（TRACE®技術和Kryptor®工作站技術）就能看出它也適用於(yu) 濃度高的血清（50%）。在讀板前或者孵育時加入氟離子能增強實驗對大量化合物的抗幹擾性。

以鈾氨基丁三醇穴（TBP鈾）為(wei) 例，雙吡啶的一部分增加活化參數達到大約25-30kcal/mole 的ΔG*。因此穴結構分子能被用於(yu) 惡劣的化學條件，例如在固相肽類合成過程中，穴結構分子在存在的固相化學和反相色譜中非常穩定，而不用考慮鈾會(hui) 從(cong) 籠中分離。作為(wei) 對比的是螯合物躍遷很容易達到0-10 kcal/mole的ΔG*，例如羧酸根部分質子化。這就解釋了為(wei) 什麽(me) 螯合物跟穴結構分子不一樣，在酸性介質中不穩定，稀有金屬離子容易被介質中的離子如錳置換。

時間靈活和實驗安全
如果儀(yi) 器壞了，在一段時間之後仍然可以讀板。HTRF結果能持續7天以上保持穩定且較大的實驗窗口。

動力學研究
穴沒有光漂白性，多次讀數後信號沒有損失。因此能按照需要的次數去讀，這就給許多實驗的動力學檢測提供了可能。

靈活的實驗模式
許多化學和生物添加劑，如帶血清的培養(yang) 液，牛血清白蛋白，二甲基亞(ya) 碸，去汙劑，酶的淬滅劑（EDTA），對實驗測量沒有幹擾因而給實驗提供了很大的靈活性。