——微生物培養(yang) 基核心成分的專(zhuan) 業(ye) 解析
蛋白腖(Peptone)是一種由動物組織(如牛肉、酪蛋白)或植物蛋白(如大豆)經酶解或酸水解製備的氮源物質,廣泛用於(yu) 微生物培養(yang) 基的配製。其核心功能包括:
提供氮源:為(wei) 微生物生長提供氨基酸、多肽及小分子肽類。
促進生長:含維生素、礦物質等微量成分,加速菌體(ti) 代謝。
增強適應性:不同來源的蛋白腖可優(you) 化特定菌株的生長環境。
類型 | 原料來源 | 適用場景 | 特點 |
---|---|---|---|
動物源蛋白腖 | 牛肉、豬骨 | 細菌、真菌培養(如大腸杆菌、酵母) | 氨基酸組成豐富,含維生素B族 |
植物源蛋白腖 | 大豆、小麥 | 乳酸菌、植物內生菌培養 | 低過敏原性,適合植物共生菌研究 |
酪蛋白腖 | 牛奶酪蛋白 | 分子生物學實驗(如質粒轉化) | 純度高,批次間穩定性強 |
胰蛋白腖 | 動物胰酶水解 | 高要求微生物(如支原體、衣原體) | 富含支鏈氨基酸,促進細胞膜合成 |
指標 | 標準值 | 檢測方法 |
---|---|---|
總氮含量 | ≥12.0% | 凱氏定氮法 |
氨基酸含量 | ≥8.0% | 高效液相色譜法(HPLC) |
灰分 | ≤5.0% | 灼燒法 |
pH值(1%水溶液) | 6.5-7.5 | 電位滴定法 |
溶解性 | 全溶,無沉澱 | 目視觀察 |
培養(yang) 基配製
按配方比例稱取蛋白腖(如LB培養(yang) 基:10 g/L蛋白腖),加入蒸餾水攪拌溶解。
調節pH至目標值(如7.0±0.2),121℃高壓滅菌20分鍾。
無菌操作
滅菌後培養(yang) 基需在超淨台內(nei) 分裝,避免二次汙染。
固體(ti) 培養(yang) 基冷卻至50-55℃時倒平板,防止冷凝水過多。
儲(chu) 存條件
未開封的蛋白腖需密封保存於(yu) 幹燥陰涼處,避免吸潮結塊。
開封後建議分裝,4℃冷藏保存,有效期6個(ge) 月。
微生物發酵:作為(wei) 氮源用於(yu) 抗生素(如青黴素)、氨基酸(如穀氨酸)的生產(chan) 。
分子生物學:在LB、SOB等培養(yang) 基中促進質粒擴增和轉化效率。
食品微生物檢測:用於(yu) 沙門氏菌、金黃色葡萄球菌的分離培養(yang) 。
環境科學:研究土壤微生物群落對不同氮源的響應。
微生物生長測試
在LB培養(yang) 基中接種大腸杆菌(E. coli),37℃培養(yang) 12小時後,菌落直徑應≥2 mm。
氨基酸譜分析
使用HPLC檢測,必需氨基酸(如亮氨酸、異亮氨酸)占比≥30%。
無菌驗證
按《中國藥典》2020版要求,37℃培養(yang) 7天,無菌生長。
原料溯源
動物源蛋白腖需確認原料無瘋牛病(BSE)風險,植物源需避免轉基因成分。
批次一致性
長期實驗建議使用同一供應商的同一批次產(chan) 品,減少實驗誤差。
替代方案
對高成本實驗,可嚐試酵母提取物(Yeast Extract)部分替代蛋白腖(比例1:1)。
Q:蛋白腖結塊是否影響使用?
A:輕微結塊可微波低火加熱溶解,嚴(yan) 重結塊需更換新批次。
Q:如何降低培養(yang) 基泡沫?
A:減少蛋白腖用量至8 g/L,或添加0.1%消泡劑(如聚二甲基矽氧烷)。
Q:蛋白腖與(yu) 水解酪蛋白(Casein Hydrolysate)的區別?
A:蛋白腖為(wei) 多肽混合物,水解酪蛋白為(wei) 更小分子肽,適合不同菌株需求。
推薦品牌:Oxoid、BD Difco、青島海博生物
檢測標準:符合USP、EP、CP藥典要求
技術支持:提供氨基酸譜分析報告及微生物生長驗證數據