QIAGEN 19133蛋白酶K(10ml)用戶指南

摘要：本文為(wei) 科研人員提供QIAGEN 19133蛋白酶K(10ml)的詳細用戶指南。介紹了該產(chan) 品的基本信息、原理、應用場景、操作步驟、注意事項及性能參數，旨在幫助用戶更好地理解和使用該產(chan) 品，以提升實驗效率與(yu) 準確性。
關(guan) 鍵詞：QIAGEN 19133蛋白酶K；DNA和RNA製備；蛋白酶消化；用戶指南

一、引言

在分子生物學實驗中，DNA和RNA的製備是至關(guan) 重要的步驟。蛋白酶K作為(wei) 一種高效的蛋白酶，在DNA和RNA製備過程中的蛋白酶消化步驟中發揮著關(guan) 鍵作用。QIAGEN 19133蛋白酶K(10ml)憑借其高活性、廣泛的底物特異性和穩定的性能，本文將詳細介紹該產(chan) 品的相關(guan) 信息，以幫助用戶更好地使用。

二、產品概述

（一）基本信息

• 品牌：QIAGEN

• 產(chan) 品名稱：蛋白酶K（Proteinase K）

• 貨號：19133

• 規格：10ml

• 存儲(chu) 條件：2—8℃

（二）產品原理

QIAGEN蛋白酶K是一種從(cong) 腐生真菌Tritirachium album中分離出來的枯草杆菌蛋白酶型蛋白酶。它具有很高的比活性，能在很寬的溫度（通常在37—70℃範圍內(nei) 活性較高）和pH值（pH 4.0—12.0，最佳pH為(wei) 7.5—9.0）範圍內(nei) 保持穩定，且在較高溫度下活性大大提高。可溶性鈣對於(yu) 其酶活性不是必需的，這意味著用於(yu) 抑製Mg²⁺依賴性酶（如核酸酶）的EDTA不會(hui) 抑製蛋白酶K的活性。

三、產品特點

（一）高活性

在多種DNA和RNA純化流程常用的緩衝(chong) 液中提供高活性，如30 mM Tris·Cl、30 mM EDTA、5% Tween 20、0.5% Triton X-100、800 mM GuHCl等緩衝(chong) 液中，都能保持較高的活性。

（二）廣泛的底物特異性

適用於(yu) 多種樣本的蛋白酶消化，包括血液、細胞培養(yang) 基、組織、細菌等，能夠高效地消化樣本中的蛋白質，為(wei) 後續的DNA和RNA提取創造有利條件。

（三）穩定性好

在很寬的溫度和pH值範圍內(nei) 可保持穩定，並且在高溫時具有更高活性，這使得它能夠適應不同的實驗條件和樣本類型。

（四）不含DNase和RNase活性

避免了在消化過程中對DNA和RNA的降解，保證了後續提取的核酸的質量。

四、應用場景

（一）DNA提取

在從(cong) 血液、細胞培養(yang) 基和組織中純化DNA的過程中，蛋白酶K能夠有效地消化樣本中的蛋白質，使DNA得以釋放和純化。例如，在QIAGEN Genomic-tip操作流程中使用的Buffer G2（30 mM Tris·Cl；30 mM EDTA；5% Tween 20；0.5% Triton X-100；800 mM GuHCl）中，蛋白酶K表現出較高的活性，有助於(yu) 從(cong) 複雜樣本中高效提取DNA。

（二）RNA提取

在RNA提取過程中，蛋白酶K同樣能夠消化蛋白質，減少RNA的降解，提高RNA的純度和產(chan) 量。

（三）其他應用

除了DNA和RNA提取，蛋白酶K還可用於(yu) 其他需要蛋白酶消化的實驗，如蛋白質組學研究中的樣品處理等。

五、操作步驟

（一）配製蛋白酶K溶液

一般配製濃度為(wei) 20mg/ml蛋白酶K溶液。例如，可將200mg的蛋白酶K加入到9.5ml dd水中，輕輕搖動，直至蛋白酶K溶解。不要渦旋混合，再加水定容到10ml，最後分裝成小份貯存於(yu) -20℃。

（三）使用方法

1. 根據終濃度50—100μg/ml，吸取適量蛋白酶K溶液，滴到消化樣品中。

2. 孵育：孵育溫度為(wei) 55—65℃，理想孵育溫度為(wei) 58℃，孵育時間為(wei) 15min至48h，依據樣本情況而定。

3. 後續處理：孵育完成後，按照相應的DNA或RNA提取試劑盒的操作步驟進行後續處理。

六、注意事項

（一）操作防護

本產(chan) 品對人體(ti) 有害，操作時請務必穿實驗服，戴一次性手套和口罩，避免直接接觸人體(ti) 或吸入體(ti) 內(nei) 。

（二）稀釋建議

如果需把20mg/ml的蛋白酶K再稀釋，建議使用pH7.4—7.8的10mM Tris-HCl進行稀釋。

（三）避免同時使用

使用手動QIAamp DNA Blood Kit和QIAGEN Blood & Cell Culture DNA Kit的用戶應該用7ml蒸餾水重懸每個(ge) 瓶中的QIAGEN Protease。使用QIAamp DNA Blood BioRobot 9604 Kit的用戶應該用10ml蒸餾水重懸每個(ge) 瓶中的QIAGEN Protease。QIAGEN蛋白酶不可與(yu) DNeasy Tissue、DNeasy 96 Tissue及QIAamp DNA Mini Kit中的ATL緩衝(chong) 液同時使用。

（四）特殊條件下的注意事項

在SDS濃度大於(yu) 0.5%、肌氨酰濃度大於(yu) 1%、或有高濃度的其他去汙劑時，EDTA的濃度必須小於(yu) 8mM，這樣才能在延長的孵育時間內(nei) 達到安全活性。

（五）儲存條件

啟用後如需反複使用，應置於(yu) -20℃—-80℃冰箱冷凍保存，或配製成溶液後過濾除菌並分裝保存。

七、性能參數

（一）活性

600mAU/ml（在規定條件下，每分鍾釋放1μmol酪氨酸所需酶量為(wei) 1個(ge) 活性單位）。

（二）純度

Native PAGE電泳檢測純度≥95%。

（三）比活性

比活性值≥30U/mg蛋白。

（四）穩定性

在尿素和SDS中活性穩定，在pH4.0—12.0範圍內(nei) 均有活性，最佳pH為(wei) 7.5—9.0。

八、結論

QIAGEN 19133蛋白酶K(10ml)是一種高效、穩定的蛋白酶，適用於(yu) DNA和RNA製備過程中的蛋白酶消化。通過遵循本用戶指南中的操作步驟和注意事項，科研人員可以更好地利用該產(chan) 品，提高實驗效率和準確性。