Lucerna Technologies 200-100 Cyclic-di-GMP Assay用戶指南

摘要

本文旨在為(wei) 科研人員提供Lucerna Technologies 200-100 Cyclic-di-GMP Assay的詳細用戶指南。該產(chan) 品是一種用於(yu) 測量細胞中環二鳥苷酸（c-di-GMP）水平的均質熒光測定試劑，具有高選擇性、高靈敏度和操作簡便等優(you) 點。本文將介紹產(chan) 品的原理、特點、應用場景、操作步驟、注意事項及性能參數，幫助用戶更好地理解和使用該產(chan) 品。

關(guan) 鍵詞：環二鳥苷酸（c-di-GMP）；均質熒光測定；Lucerna Technologies 200-100；用戶指南

一、引言

環二鳥苷酸（c-di-GMP）是細菌所有的一類核酸類第二信使，參與(yu) 並調節細菌多種生理功能，包括細胞分化、生物被膜的形成以及致病因子的產(chan) 生等。因此，準確測量細胞內(nei) c-di-GMP水平對於(yu) 研究細菌生理活動及開發新型抗菌藥物具有重要意義(yi) 。Lucerna Technologies 200-100 Cyclic-di-GMP Assay作為(wei) 一種新型的均質熒光測定試劑，為(wei) 科研人員提供了便捷、高效的c-di-GMP檢測手段。

二、產品原理

Lucerna Technologies 200-100 Cyclic-di-GMP Assay基於(yu) 熒光適體(ti) （Spinach™）技術，通過c-di-GMP與(yu) 傳(chuan) 感器中c-di-GMP核糖開關(guan) 的初始結合，導致Spinach™適體(ti) 的穩定，進而結合DFHBI-1T以產(chan) 生熒光。熒光信號的強度與(yu) c-di-GMP的濃度成正比，通過測量熒光強度即可確定細胞內(nei) c-di-GMP的水平。

三、產品特點

1. 高選擇性：該試劑對c-di-GMP具有高度選擇性，不受常見反配體(ti) 的幹擾。即使與(yu) 過量500—1000倍的反配體(ti) （如GMP、pGpG和c-AMP-GMP）相比，也能實現出色的檢測性能。

2. 高靈敏度：該試劑的檢測限為(wei) 50nM，具有寬廣的動態範圍，能夠準確測量低濃度的c-di-GMP。

3. 操作簡便：隻需將樣品與(yu) 提供的檢測試劑一起孵育30分鍾，然後在帶有FITC/GFP濾光片或激發波長482nm和發射波長505nm的熒光讀板機上讀取樣品即可。

4. 均質測定：無需造粒、裂解或洗滌步驟，可直接在均質溶液中進行測量，簡化了實驗流程。

四、應用場景

Lucerna Technologies 200-100 Cyclic-di-GMP Assay適用於(yu) 多種應用場景，包括但不限於(yu) ：

1. 細菌生理研究：用於(yu) 研究c-di-GMP在細菌細胞分化、生物被膜形成及致病因子的產(chan) 生等生理過程中的作用。

2. 抗菌藥物研發：通過測量抗菌藥物處理前後細菌細胞內(nei) c-di-GMP水平的變化，評估藥物的療效及作用機製。

3. 環境監測：用於(yu) 檢測環境樣品中細菌的c-di-GMP水平，評估環境汙染程度及細菌汙染狀況。

五、操作步驟

1. 樣品準備：收集待測細菌細胞，用適當的緩衝(chong) 液懸浮細胞，調整細胞密度至適宜範圍。

2. 試劑添加：向樣品中加入提供的檢測試劑，包括c-di-GMP傳(chuan) 感器和熒光團DFHBI-1T。

3. 孵育：將樣品與(yu) 試劑混合均勻後，在37℃下孵育30分鍾。

4. 熒光測量：將孵育後的樣品轉移至熒光讀板機中，使用FITC/GFP濾光片或激發波長482nm和發射波長505nm進行熒光測量。

5. 數據分析：根據熒光強度與(yu) c-di-GMP濃度的標準曲線，計算樣品中c-di-GMP的濃度。

六、注意事項

1. 試劑保存：試劑應保存在-20℃下，避免反複凍融。使用前應將試劑平衡至室溫，並充分混勻。

2. 樣品處理：樣品處理過程中應避免汙染，確保樣品的純淨度。同時，應注意樣品的細胞密度，避免過高或過低的細胞密度影響測量結果。

3. 儀(yi) 器校準：在使用熒光讀板機進行測量前，應對儀(yi) 器進行校準，確保測量結果的準確性。

4. 實驗重複性：為(wei) 了提高實驗結果的可靠性，建議進行多次重複實驗，並取平均值作為(wei) 最終結果。

七、性能參數

1. 檢測限：50nM

2. 線性範圍：0.5—400nM

3. 靈敏度：比適配體(ti) （500pM）的靈敏度高約1個(ge) 數量級

4. 特異性：對c-di-GMP具有高度選擇性，不受常見反配體(ti) 的幹擾

5. 動態範圍：寬廣的動態範圍，能夠準確測量不同濃度的c-di-GMP

八、結論

Lucerna Technologies 200-100 Cyclic-di-GMP Assay作為(wei) 一種新型的均質熒光測定試劑，為(wei) 科研人員提供了便捷、高效的c-di-GMP檢測手段。該試劑具有高選擇性、高靈敏度和操作簡便等優(you) 點，適用於(yu) 多種應用場景。通過遵循本用戶指南中的操作步驟和注意事項，科研人員可以準確測量細胞內(nei) c-di-GMP水平，為(wei) 細菌生理研究及抗菌藥物研發提供有力支持。