Thermo PA542808 KYNU ANTIBODY 100 μL 用戶指南

Thermo PA542808 KYNU ANTIBODY 100 μL 用戶指南

——精準靶向犬尿氨酸酶（KYNU）的高效科研工具

一、產品概述

Thermo PA542808 KYNU ANTIBODY 100 μL 是賽默飛世爾科技（Thermo Fisher Scientific）旗下 Pierce 品牌研發的單克隆抗體(ti) ，專(zhuan) 為(wei) 檢測和定量犬尿氨酸酶（Kynureninase, KYNU）設計。該抗體(ti) 通過重組人源 KYNU 抗原免疫新西蘭(lan) 白兔製備，經抗原親(qin) 和純化，確保高特異性和低背景信號。

核心參數：

• 貨號：PA542808

• 規格：100 μg（100 μL）

• 種屬來源：Rabbit Monoclonal

• 宿主/亞(ya) 型：Rabbit IgG

• 純化類型：抗原親(qin) 和純化

• 保存條件：短期（2-8℃），長期（-20℃），避免反複凍融

• 應用：免疫印跡（WB）、免疫組化（IHC）、免疫熒光（IF）、ELISA

二、技術優勢

1. 高特異性與(yu) 靈敏度

• WB：1:1000-1:5000 稀釋度下，可檢測 45-50 kDa 人源 KYNU 蛋白。

• IHC：1:50-1:200 稀釋度下，人肝組織細胞質呈強陽性染色。

• IF：0.5-2 μg/mL 濃度下，HeLa 細胞中 KYNU 定位清晰。

• 抗原設計：基於(yu) 人源 KYNU 重組蛋白（覆蓋氨基酸序列片段），與(yu) 鼠源（高序列一致性）和大鼠源（高序列一致性）同源蛋白具有交叉反應性。

• 驗證數據：

2. 穩定的質量控製

• 每批次抗體(ti) 均通過 WB、IHC 和 ELISA 驗證，確保批間一致性。

• 提供 RRID（如適用），支持實驗結果的可重複性驗證。

3. 靈活的應用場景

• WB：適用於(yu) 檢測內(nei) 源性或過表達 KYNU 蛋白。

• IHC：適用於(yu) 石蠟切片或冰凍切片，可結合 DAB 或熒光底物顯色。

• IF：適用於(yu) 活細胞或固定細胞，可與(yu) 其他細胞器標記物共定位分析。

三、操作指南

（一）實驗前準備

1. 試劑與(yu) 耗材

• 抗體(ti) ：Thermo PA542808 KYNU ANTIBODY 100 μL

• 封閉液：5% BSA 或 10% 脫脂奶粉（PBST 配製）

• 一抗稀釋液：PBST + 0.1% Tween-20

• 二抗：根據實驗選擇 HRP 或熒光標記抗兔 IgG

2. 樣本準備

• WB：細胞裂解液（含蛋白酶抑製劑）或組織勻漿液，蛋白濃度 1-5 μg/μL。

• IHC：石蠟切片脫蠟至水，或冰凍切片固定。

• IF：多聚甲醛固定細胞，0.1% Triton X-100 透化。

（二）實驗操作

1. WB

• 電泳：8-12% SDS-PAGE，上樣 20-50 μg 蛋白。

• 轉膜：PVDF 膜，200 mA 恒流轉膜 90 分鍾。

• 封閉：5% BSA，室溫孵育 1 小時。

• 一抗孵育：PA542808 抗體(ti) （1:2000 稀釋），4℃ 過夜。

• 二抗孵育：HRP 標記抗兔 IgG（1:5000 稀釋），室溫 1 小時。

• 顯色：ECL 底物，化學發光成像。

2. IHC

• 抗原修複：檸檬酸鹽緩衝(chong) 液（pH 6.0）高壓修複 10 分鍾。

• 封閉：10% 羊血清，室溫 30 分鍾。

• 一抗孵育：PA542808 抗體(ti) （1:100 稀釋），4℃ 過夜。

• 二抗孵育：HRP 標記抗兔 IgG（1:200 稀釋），室溫 30 分鍾。

• 顯色：DAB 底物，蘇木精複染。

3. IF

• 封閉：10% 羊血清，室溫 1 小時。

• 一抗孵育：PA542808 抗體(ti) （1 μg/mL），4℃ 過夜。

• 二抗孵育：Alexa Fluor 488 標記抗兔 IgG（1:500 稀釋），室溫 1 小時。

• 核染色：DAPI（1 μg/mL），室溫 5 分鍾。

（三）實驗後分析

• WB：使用 ImageJ 或 AlphaView 軟件定量條帶灰度值。

• IHC：通過 ImageJ 或 Halo 軟件分析陽性細胞比例。

• IF：使用共聚焦顯微鏡采集圖像，分析共定位係數。

四、使用技巧與高效操作

1. 抗體(ti) 稀釋優(you) 化

• 建議從(cong) 1:1000 開始梯度稀釋，根據實驗結果調整。

• 避免重複凍融，分裝後保存。

2. 內(nei) 參選擇

• WB：推薦使用 GAPDH 或 β-Actin 作為(wei) 內(nei) 參。

• IHC：可結合 DAPI 染色評估細胞核完整性。

3. 對照設置

• 陽性對照：已知表達 KYNU 的細胞係（如 HepG2、HeLa）。

• 陰性對照：省略一抗或使用同型對照抗體(ti) 。

五、注意事項

1. 安全規範

• 抗體(ti) 僅(jin) 供科研使用，不可用於(yu) 人體(ti) 或動物實驗。

• 操作時佩戴手套，避免直接接觸。

2. 操作細節

• WB：轉膜後需用麗(li) 春紅染色確認轉膜效率。

• IHC：抗原修複後需充分冷卻至室溫，避免非特異性結合。

• IF：透化時間需根據細胞類型優(you) 化，避免過度透化。

3. 故障排除

• 高背景：增加封閉時間或提高抗體(ti) 稀釋度。

• 無信號：檢查一抗保存條件，或延長孵育時間。