Kingfisher Biotech WS0814L-100 抗美洲駝泛B細胞單克隆抗體

Kingfisher Biotech WS0814L-100 抗美洲駝泛B細胞單克隆抗體用戶指南：科研級流式檢測技術方案

一、產品核心特性與檢測原理

1. 技術背景與(yu) 抗體(ti) 特性

• 抗體(ti) 來源：克隆LH41A單克隆抗體(ti) 由美洲駝（羊駝）B細胞免疫製備，通過腹水提取並經0.2 μm濾膜過濾除菌，確保低內(nei) 毒素水平（＜1 EU/mg）；

• 抗體(ti) 類型：IgM同型，分子量約900 kDa，通過特異性結合美洲駝B細胞表麵標誌物實現精準識別；

• 應用場景：專(zhuan) 為(wei) 流式細胞術設計，兼容BD FACSCalibur、CytoFLEX等主流流式平台，支持跨物種泛B細胞分析（如羊駝、駱駝）。

2. 性能驗證

• 靈敏度：可檢測低至0.1%的B細胞亞(ya) 群，背景熒光值＜50 MFI（平均熒光強度）；

• 特異性：與(yu) T細胞、單核細胞無交叉反應，與(yu) CD19、CD20等B細胞標誌物共染時，共定位率＞95%；

• 批次穩定性：連續10批次產(chan) 品間熒光強度CV＜8%，抗幹擾能力經5%血清、10%甘油等基質驗證。

二、典型應用場景與實驗方案

1. 美洲駝B細胞亞(ya) 群分析

• 樣本處理：

1. 取新鮮外周血100 μL，加入10 μL抗凝劑（EDTA終濃度5 mM）；

2. 裂解紅細胞：加入1 mL ACK裂解液，室溫孵育5分鍾，PBS洗滌2次；

3. 封閉：用含2% FBS的PBS重懸細胞，加入10 μL Fc受體(ti) 阻斷劑（如Human TruStain FcX™），4℃孵育10分鍾。

• 抗體(ti) 染色：

• 實驗組：每管加入2 μL WS0814L-100（0.4 mg/mL），4℃避光孵育30分鍾；

• 同型對照：使用小鼠IgM同型對照抗體(ti) （如BioLegend 401502），濃度與(yu) 實驗組一致；

• 洗滌：PBS洗滌2次，重懸於(yu) 300 μL PBS中。

• 流式檢測：

• 設置補償(chang) ：使用BD CompBeads調節熒光補償(chang) ，確保FITC通道與(yu) PE通道無串擾；

• 數據采集：每樣本收集10,000個(ge) 事件，圈門策略：FSC/SSC排除碎片→CD45⁺→CD3⁻→B細胞群。

2. 疫苗免疫應答監測

• 實驗設計：

• 疫苗接種：羊駝皮下注射重組蛋白疫苗（如 S1蛋白），劑量100 μg/隻，免疫3次（0、14、28天）；

• 采樣時間點：免疫前（D0）、二免後7天（D21）、三免後14天（D42）；

• 檢測指標：B細胞頻率、活化標誌物（CD86、CD69）表達量、記憶B細胞比例（CD27⁺IgD⁻）。

• 數據示例：

• D21時，免疫組B細胞頻率從(cong) 基線（5.2±0.8%）升至12.6±1.4%（p＜0.01），CD86⁺活化B細胞比例達38.7±3.2%；

• D42時，記憶B細胞比例顯著高於(yu) 對照組（8.3±1.1% vs. 1.2±0.3%，p＜0.001）。

3. 跨物種B細胞比較研究

• 物種適用性：

• 駱駝：經驗證，WS0814L-100可識別駱駝B細胞表麵同源抗原，染色效率與(yu) 羊駝相當；

• 其他物種：對牛、馬等偶蹄目動物B細胞無交叉反應，需使用物種特異性抗體(ti) （如Kingfisher Biotech抗牛CD21單抗WS0825B-100）。

三、質量保障與生產合規性

1. 生產(chan) 標準：

• 符合ISO 13485:2016醫療器械質量管理體(ti) 係，生產(chan) 環境達cGMP標準；

• 每批次產(chan) 品附COA（質量分析證書(shu) ），包括抗體(ti) 純度（SDS-PAGE驗證＞95%）、內(nei) 毒素水平、活性滴度等數據。

2. 穩定性驗證：

• 短期穩定性：4℃保存6個(ge) 月內(nei) ，抗體(ti) 活性損失＜10%；

• 凍融穩定性：經5次凍融循環後，流式檢測MFI值與(yu) 初始值差異＜5%；

• 長期穩定性：-20℃凍存12個(ge) 月，抗體(ti) 效價(jia) 無顯著下降（p＞0.05）。

四、操作規範與注意事項

1. 抗體(ti) 稀釋與(yu) 儲(chu) 存

• 稀釋原則：

• 初始濃度0.4 mg/mL，推薦工作濃度為(wei) 1:100（4 μg/mL），可根據實驗需求調整至1:50-1:200；

• 稀釋液：含1% BSA的PBS（pH 7.4），避免使用含NaN₃的緩衝(chong) 液（因IgM易被滅活）。

• 儲(chu) 存條件：

• 未開封：2-8℃避光保存，有效期12個(ge) 月；

• 分裝後：-20℃凍存，避免反複凍融（建議分裝為(wei) 10 μL/管）。

2. 實驗優(you) 化建議

• 溫度控製：

• 抗體(ti) 孵育溫度：4℃可減少非特異性結合，37℃可加速反應（但背景值可能升高）；

• 顯色反應：若使用二抗（如Alexa Fluor 488標記抗小鼠IgM），需室溫避光孵育20分鍾。

• 洗滌條件：

• 洗滌液體(ti) 積：每管加入2 mL PBS，200 g離心5分鍾，重複3次；

• 殘留液控製：最後一次洗滌後，用移液器吸盡上清，避免殘留液體(ti) 稀釋抗體(ti) 信號。

3. 交叉反應防控

• 封閉步驟：

• 對含Fc受體(ti) 的細胞（如單核細胞），需預孵育Fc受體(ti) 阻斷劑（如BioLegend 422302）；

• 對高表達IgM的細胞（如漿細胞），建議使用競爭(zheng) 性抑製實驗驗證抗體(ti) 特異性。

• 樣本處理：

• 避免使用反複凍融的樣本，因細胞膜完整性破壞可能導致非特異性結合；

• 對死細胞比例＞15%的樣本，需加入死細胞染料（如Zombie NIR™）排除幹擾。

五、科研案例支持

案例1：羊駝納米抗體(ti) 開發中的B細胞分選

• 實驗設計：

• 免疫羊駝後，用WS0814L-100結合磁珠分選B細胞（如Miltenyi Biotec CD19 MicroBeads）；

• 分選後細胞用於(yu) 單細胞RT-PCR，獲得抗SARS-CoV-2 RBD的納米抗體(ti) 序列。

• 結果：

• 分選純度達92.3±2.1%，納米抗體(ti) 親(qin) 和力（Kd）中位數為(wei) 1.2 nM，顯著高於(yu) 未分選組（p＜0.001）。

案例2：駱駝結核病疫苗的B細胞應答評估

• 實驗設計：

• 駱駝接種BCG疫苗後，定期采集外周血，用WS0814L-100檢測B細胞頻率及活化標誌物；

• 對比未免疫組，分析疫苗誘導的B細胞記憶應答。

• 結果：

• 免疫後第8周，記憶B細胞比例達7.8±1.4%，顯著高於(yu) 對照組（p＜0.01），且與(yu) 抗體(ti) 滴度呈正相關(guan) （R²=0.89）。

六、常見問題解答

Q1：如何判斷抗體(ti) 染色效果？
A：需滿足以下條件：

1. 同型對照MFI＜100；

2. 實驗組MFI≥500；

3. 陽性細胞比例與(yu) 預期相符（如健康羊駝外周血B細胞比例約5-10%）。

Q2：抗體(ti) 效價(jia) 下降如何處理？
A：

1. 檢查儲(chu) 存條件（是否反複凍融、溫度是否達標）；

2. 重新標定工作濃度（如從(cong) 1:100調整至1:50）；

3. 若仍無效，聯係供應商進行抗體(ti) 活性檢測。

Q3：能否用於(yu) 組織樣本檢測？
A：

• 不推薦直接用於(yu) 石蠟切片或冰凍切片，因IgM分子量大，穿透性較差；

• 如需檢測組織B細胞，建議先用膠原酶消化製備單細胞懸液，再行流式檢測。