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DyLight 係列：DyLight 係列熒光染料涵蓋了從(cong) 可見光到紅外光區域的多種產(chan) 品，如 DyLight 488、DyLight 549、DyLight 649、DyLight 680 和 DyLight 800 等。這些染料的激發和發射光譜與(yu) 常見的激光和濾光片組兼容，在免疫分析、蛋白質印跡、微陣列、細胞染色、流式細胞術和免疫熒光等多種應用中表現出色。例如，在免疫熒光實驗中，DyLight 染料標記的抗體(ti) 能夠清晰地顯示細胞內(nei) 目標蛋白的定位和分布，為(wei) 研究蛋白質的功能和細胞內(nei) 信號傳(chuan) 導途徑提供了有力工具。苯Pro - Q Diamond 熒光染料：該染料專(zhuan) 門用於(yu) 磷酸化蛋白質的染色。其具有方便、快速、高靈敏度的特點，線性範圍超過 3 個(ge) 數量級，並且與(yu) 質譜鑒定兼容。在 2003 年由 Molecular Probes 的 Wavne Patton 報道，其激發光波長為(wei) 488 nm，吸收峰波長為(wei) 532 nm。研究人員通過將一些蛋白質和肽點樣在蛋白質芯片上，使用 Pro - Q Diamond 檢測芯片上蛋白質和肽的磷酸化水平，靈敏度可達 312 - 625 fg，為(wei) 信號通路和磷酸酶抑製研究提供了良好的平台 。
ProteOrange® 染料：用於(yu) 聚丙烯酰胺凝膠電泳後蛋白質的快速可視化。它是一種含有兩(liang) 性離子片段的芪型熒光團，在核酸、多糖和其他分子存在的情況下，蛋白質 / 十二烷基硫酸鈉膠束（SDS）會(hui) 選擇性地結合該染料。分子量在 6 kDa 及以上的蛋白質可被有效染色，熒光信號與(yu) 蛋白質濃度在三個(ge) 數量級的濃度範圍內(nei) 呈線性關(guan) 係。ProteOrange 凝膠染色的靈敏度約為(wei) 考馬斯亮藍染色的十倍，雖然低於(yu) 銀染色，但與(yu) 銀染色相比，其染色方案要簡單得多，不需要洗滌，對於(yu) 標準 SDS - PAGE 也不需要固定步驟。整個(ge) 染色過程 30 - 60 分鍾即可完成，包括將凝膠在含有染料的 7.5% 乙酸水溶液中孵育，然後用 7.5% 乙酸短暫衝(chong) 洗 30 秒。使用波長為(wei) 312 - 365 nm 的透射儀(yi) 即可進行可視化。
Lumitein™蛋白質凝膠染色劑：設計用於(yu) 檢測 SDS 聚丙烯酰胺（SDS - PAGE）凝膠中的蛋白質，經過額外的 SDS 孵育步驟後，也可用於(yu) 檢測天然 PAGE 凝膠中的蛋白質。該染色劑具有靈敏度，可檢測到小於(yu) 1 ng 的蛋白質，與(yu) 銀染色靈敏度相當。操作簡單快速，固定和染色可在 30 - 90 分鍾內(nei) 一步完成，隨後隻需用清水簡單衝(chong) 洗。背景極低，與(yu) 常見儀(yi) 器兼容，可使用 300 nm 紫外凝膠盒（EB 濾光片）、Dark Reader 或激光掃描儀(yi) 進行成像。線性檢測範圍寬，至少可達三個(ge) 數量級，並且與(yu) 下遊分析（如質譜和測序）兼容，在室溫下穩定性高 。
樣品製備與(yu) 電泳：首先，將待檢測的蛋白質樣品進行處理，如細胞裂解、組織勻漿等，以提取蛋白質。然後通過十二烷基硫酸鈉 - 聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS - PAGE）根據蛋白質分子量大小對其進行分離。
轉膜：將凝膠上分離的蛋白質轉移到固相膜（如 PVDF 膜或硝酸纖維素膜）上，使蛋白質固定在膜上，便於(yu) 後續與(yu) 抗體(ti) 結合。
封閉：用含有封閉劑（如 5% 脫脂奶粉或 BSA）的緩衝(chong) 液孵育膜，封閉膜上非特異性結合位點，減少背景信號。
一抗孵育：將膜與(yu) 特異性識別目標蛋白的一抗孵育，一抗與(yu) 目標蛋白特異性結合。孵育條件通常為(wei) 4℃過夜或室溫孵育 1 - 2 小時，具體(ti) 時間根據抗體(ti) 說明書(shu) 確定。
二抗孵育：用洗滌緩衝(chong) 液（如 PBST）充分洗滌膜後，加入與(yu) 一抗來源物種匹配的辣根過氧化物酶（HRP）標記的二抗。二抗與(yu) 一抗結合，從(cong) 而將 HRP 標記到目標蛋白所在位置。二抗孵育一般在室溫下進行 1 - 2 小時。
洗膜：再次用洗滌緩衝(chong) 液充分洗滌膜，去除未結合的二抗，以降低背景信號。
發光液混合與(yu) 孵育：新鮮配製 ECL 工作液，將 A 液和 B 液按照 1:1 的比例混合均勻。將混合後的發光液均勻覆蓋在膜表麵，確保膜浸潤在發光液中，室溫孵育 1 - 5 分鍾，使發光反應充分進行。
信號檢測：孵育完成後，用鑷子小心取出膜，去除多餘(yu) 的發光液（可將膜輕靠在吸水紙上吸幹多餘(yu) 液體(ti) ，但避免膜幹燥）。若使用 X 射線膠片檢測，將膜放入雜交袋中，排出空氣後密封，在暗室中將膠片覆蓋在膜上曝光適當時間（根據信號強度調整曝光時間，從(cong) 幾秒到數小時不等），然後進行膠片顯影和定影處理；若使用化學發光成像儀(yi) 檢測，將膜放入成像儀(yi) 樣品室中，設置合適的曝光時間和增益參數，進行圖像采集和分析 。
染料選擇與(yu) 準備：根據實驗目的和蛋白質特性選擇合適的熒光染料，並按照說明書(shu) 要求將染料溶解在適當的溶劑中，配製成所需濃度的工作液。
蛋白質標記：將待標記的蛋白質與(yu) 熒光染料工作液按照一定比例混合，在適當條件下孵育，使染料與(yu) 蛋白質充分結合。反應條件（如溫度、時間、pH 值等）需根據染料類型和蛋白質性質進行優(you) 化。例如，對於(yu) 一些與(yu) 氨基反應的熒光染料，通常在中性或弱堿性條件下進行標記反應，孵育時間一般為(wei) 1 - 2 小時。
標記後處理：標記反應完成後，通過透析、超濾或凝膠過濾等方法去除未結合的遊離染料，以獲得純淨的標記蛋白質樣品。
檢測與(yu) 分析：將標記好的蛋白質樣品用於(yu) 後續實驗，如免疫熒光染色、流式細胞術分析等。在檢測過程中，使用相應的熒光激發光源和檢測設備，根據熒光信號的強度、分布等參數對蛋白質進行定性和定量分析。例如，在免疫熒光染色實驗中，將標記蛋白質的樣品與(yu) 細胞或組織切片孵育，然後在熒光顯微鏡下觀察熒光信號，確定蛋白質在細胞或組織中的定位和表達水平 。
蛋白質表達與(yu) 功能研究：在探究基因功能時，需要了解基因表達產(chan) 物 —— 蛋白質的表達水平和功能。通過使用蛋白發光染液，科研人員可以準確檢測蛋白質在不同細胞係、組織或發育階段的表達變化。例如，在研究腫瘤發生機製時，利用 ECL 超敏發光液結合 Western Blot 技術，檢測腫瘤相關(guan) 蛋白在正常細胞和腫瘤細胞中的表達差異，有助於(yu) 發現潛在的腫瘤標誌物和治療靶點。在蛋白質功能研究方麵，通過熒光染料標記蛋白質，可以實時追蹤蛋白質在細胞內(nei) 的定位、運動和相互作用，深入了解蛋白質的生物學功能和參與(yu) 的信號通路 。
蛋白質修飾研究：蛋白質的修飾（如磷酸化、乙酰化、甲基化等）對其功能具有重要調節作用。Pro - Q Diamond 等專(zhuan) 門用於(yu) 檢測特定修飾蛋白質的發光染液，為(wei) 研究蛋白質修飾提供了有力手段。通過檢測修飾蛋白質的含量和分布變化，研究人員可以揭示蛋白質修飾在細胞生理過程、疾病發生發展中的作用機製 。
重組蛋白生產(chan) 與(yu) 質量控製：在重組蛋白藥物的生產(chan) 過程中，需要對重組蛋白的表達、純化和質量進行嚴(yan) 格監控。蛋白發光染液可用於(yu) 檢測重組蛋白的表達水平、純度以及是否存在降解產(chan) 物。例如，在發酵液中提取重組蛋白後，使用 Lumitein™蛋白質凝膠染色劑檢測蛋白質含量和純度，確保產(chan) 品質量符合標準。同時，通過熒光染料標記重組蛋白，可以研究其在體(ti) 內(nei) 的藥代動力學和藥效學特性，為(wei) 藥物研發提供重要數據 。
生物製品檢測：對於(yu) 疫苗、抗體(ti) 等生物製品，需要檢測其中蛋白質的含量、活性和穩定性。蛋白發光染液能夠快速、準確地檢測生物製品中的蛋白質成分，保障產(chan) 品的安全性和有效性。例如，在流感疫苗生產(chan) 過程中，利用 ECL 發光染液檢測疫苗中流感病毒蛋白的含量，確保疫苗劑量準確 。
疾病標誌物檢測：在臨(lin) 床診斷中，檢測血液、尿液等體(ti) 液中的疾病標誌物是早期診斷和病情監測的重要手段。許多疾病標誌物為(wei) 蛋白質，通過蛋白發光染液結合免疫檢測技術，可以高靈敏度地檢測這些微量蛋白質。例如，使用 ECL 超敏發光液檢測血液中的癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）等腫瘤標誌物，有助於(yu) 腫瘤的早期發現和預後判斷；檢測血清中的心肌肌鈣蛋白等蛋白質標誌物，可用於(yu) 急性心肌梗死的快速診斷 。
自身免疫性疾病診斷：自身免疫性疾病患者體(ti) 內(nei) 會(hui) 產(chan) 生針對自身蛋白質的抗體(ti) 。通過檢測這些自身抗體(ti) ，結合蛋白發光染液進行免疫印跡分析，可以輔助診斷自身免疫性疾病。例如，檢測抗核抗體(ti) 、抗雙鏈 DNA 抗體(ti) 等自身抗體(ti) 時，使用熒光染料標記的二抗，通過觀察熒光信號來判斷抗體(ti) 的存在和滴度，為(wei) 係統性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病的診斷提供依據 。
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