Millipore Amicon®超濾離心管助力外泌體高效分離與富集

本文深入探討了外泌體(ti) （Exosomes）研究領域中樣本製備的關(guan) 鍵挑戰。重點解析Millipore Amicon® Ultra係列超濾離心管基於(yu) 分子量截留（MWCO）原理的工作機製，詳細對比其與(yu) 傳(chuan) 統超速離心法、聚合物沉澱法在外泌體(ti) 回收率、純度、生物活性保留及操作時長等方麵的性能差異。文章結合具體(ti) 實驗數據，闡述了其在從(cong) 細胞上清液和複雜生物體(ti) 液（如血漿、尿液）中高效富集外泌體(ti) 的標準化方案，並探討其對下遊功能學研究和生物標誌物發現的重大意義(yi) 。

外泌體(ti) 作為(wei) 直徑在30-150納米的細胞外囊泡，攜帶了豐(feng) 富的蛋白質、核酸（如miRNA, lncRNA）和脂質分子，在細胞間通訊、疾病診斷和治療中展現出巨大潛力。然而，由於(yu) 其尺寸微小、異質性高且存在於(yu) 成分複雜的生物體(ti) 液中，如何高效、高純度地分離外泌體(ti) 已成為(wei) 該領域研究的首要瓶頸。傳(chuan) 統的金標準方法——超速離心（Ultracentrifugation, UC）耗時漫長（通常超過6小時），設備要求高，且高速剪切力可能損害外泌體(ti) 的完整性和功能性。聚合物沉澱法（如PEG）雖操作簡單，但會(hui) 引入大量雜蛋白，嚴(yan) 重影響下遊的蛋白質組學或測序分析。

Millipore Amicon® Ultra超濾離心管為(wei) 解決(jue) 這一難題提供了強有力的技術方案。其核心在於(yu) 采用Ultracel®再生纖維素膜，該膜具有精確的分子量截留值（例如100 kDa），通過相對低速的離心力（約4000×g）驅動，允許溶液中的小分子物質（如蛋白質、鹽離子）、水分和代謝廢物穿過膜孔，而將大於(yu) 截留分子量的目標外泌體(ti) 有效地截留並濃縮在樣本池中。

性能優(you) 勢深度分析：

1. 高回收率與(yu) 純度： 研究表明，相較於(yu) 超速離心，Amicon® Ultra超濾法能夠回收更多數量的外泌體(ti) ，且通過納米顆粒跟蹤分析（NTA）和透射電鏡（TEM）驗證，其製備的外泌體(ti) 形態完整、粒徑分布均一。通過BCA蛋白定量檢測發現，其樣本的蛋白雜質含量遠低於(yu) 聚合物沉澱法，為(wei) 後續的Western Blot、質譜分析提供了更潔淨的樣本。

2. 生物活性保留： 溫和的離心條件最大限度地減少了對外泌體(ti) 膜結構的物理損傷(shang) ，保證了其表麵抗原的完整性。功能實驗證明，經Amicon®富集的外泌體(ti) 更容易被受體(ti) 細胞內(nei) 化，並能更好地保留其調控靶細胞生物學行為(wei) 的能力。

3. 操作迅捷與(yu) 高通量兼容性： 整個(ge) 富集過程可在1小時內(nei) 完成，極大地提升了實驗效率。同時，該方法可與(yu) 多種上遊樣本類型兼容，並且易於(yu) 進行多個(ge) 樣本的平行處理，非常適合臨(lin) 床大隊列樣本的高通量篩查。

標準化工作流程建議：
對於(yu) 細胞上清液，建議先進行低速離心（2000×g）去除死細胞和細胞碎片，再通過0.22 μm濾膜去除大顆粒汙染物，最後使用Amicon® Ultra（100 kDa MWCO）進行濃縮。對於(yu) 血漿樣本，需先進行差速離心以去除血小板和可溶性大蛋白，再進行超濾富集。

結論：
Millipore Amicon® Ultra超濾離心管憑借其精確的分離原理、高效的富集能力和出色的兼容性，為(wei) 外泌體(ti) 研究提供了一個(ge) 可靠、快速且可標準化的樣本前處理工具，有力地推動了外泌體(ti) 基礎研究與(yu) 臨(lin) 床轉化應用的進程。

關(guan) 鍵詞： 外泌體(ti) 分離、超濾離心、分子量截留、樣本製備、生物標誌物